葛根中异黄酮类成分的含量分析

葛根素是葛根中的主要有效成分,因此通常测定葛根中葛根素含量的高低来判断葛根质量的优劣。目前,葛根素含量的测定方法主要有分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法等。

1.分光光度法

(1)紫外分光光度法:紫外分光光度法利用葛根素分子结构中羟基和芳环形成的共轭体系能够对紫外光(250±1nm)有较强吸收,且性质稳定,来对葛根素进行定量分析。

(2)薄层层析-比色法:该法首先利用薄层层析技术对葛根素进行分离,然后利用葛根素分子结构中的酚羟基能与磷钨酸-磷钼酸试剂产生颜色反应,在700nm波长处有最大吸收进行比色测定。由于该法需要待测组分与特定的试剂进行显示反应后测定,虽然其操作不及紫外分光光度法简便,但如果显色剂选择恰当,与紫外分光光度法相比,该法具有较好的专一性,能够避免其他成分的干扰。用薄层层析-比色法测定了葛根黄芩黄连汤中葛根素的含量,以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(27∶28∶40∶10)为展开剂,经薄层层析分离后,收集葛根素斑点,以Folinciocalteu试剂或磷钼酸试剂,再加5%磷酸钠溶液显色,在700nm处比色测定。

2.色谱法

(1)薄层扫描法(TLCS):薄层扫描法是采用一定波长的光照射薄层板,对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描,将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量的分析方法。该法用于测定葛根素的含量具有取样量少、操作简便、分离效果好、结果准确的特点。采用合适的展开剂将葛根素与其他成分完全分离后,应用双波长薄层扫描法对其含量进行测定,实验结果表明葛根素斑点在薄层板上于5h内稳定性好,并通过加样回收率实验及精密度实验证明该法准确、可靠。

(2)高效液相色谱法(HPLC):高效液相色谱法具有简便快速、分析精度高、测定结果准确、重现性好的特点,是葛根及其制剂中葛根素含量测定的常用方法,常用的流动相有甲醇-水、甲醇-醋酸-水等。以非离子表面活性剂Triton X-114为萃取剂,甲醇- 0.25%冰醋酸溶液为流动相,采用梯度洗脱,在250nm波长下,准确、快速地检测了葛根粉中葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素5种异黄酮的含量。

3.库伦滴定法　库伦滴定法采用强度一定的恒流通过电解池,此时电极反应产生的新物质将与溶液中被测物质的反应,当溶液中被测物质反应完全后,由测定仪器发出讯号,并停止电解反应,同时记录电解反应时间,则可由电解时间和电流强度计算溶液中被测物质的量。