【摘要】:超速离心机可产生高达60万g的离心力,在溶液中此离心力超过蛋白分子扩散力而使蛋白质下沉,直至离心力与其浮力相等,此时沉降停止。蛋白质下沉的速度与蛋白质相对分子质量大小、分子形状、密度及溶剂的密度有关。蛋白质在离心场中的行为用沉降系数表示。蛋白质沉降系数S与相对分子质量基本成正比关系。应用超速离心法还可测定蛋白质、核酸等生物大分子的相对分子质量,该法所得结果比SDS-PAGE法准确,而且还能保留生物大分子的活性。
每分钟转速(revolutions per minute,r/min)80 000以上者称为超速离心。超速离心机可产生高达60万g的离心力,在溶液中此离心力超过蛋白分子扩散力而使蛋白质下沉,直至离心力与其浮力相等,此时沉降停止。蛋白质下沉的速度与蛋白质相对分子质量大小、分子形状、密度及溶剂的密度有关。不同蛋白质大小、形状各异,因此可将其分开。蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient,S)表示。
dx/dt代表颗粒在离心场中的移动速度,ω为离心转头的角速度,x是距转动中心的距离,t为离心时间。沉降系数(S)用svedberg为单位(1S=10-13 s)。蛋白质沉降系数S与相对分子质量基本成正比关系。应用超速离心法还可测定蛋白质、核酸等生物大分子的相对分子质量,该法所得结果比SDS-PAGE法准确,而且还能保留生物大分子的活性。
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