抗菌药物在传染病治疗上的应用，使疾病的转归发生了根本性和决定性的变化。为了确切地了解或评价这些药物在临床治疗上的效果，必须开展药物敏感性及药物在体液内浓度的测定。
体液内药物浓度的测定，与确定体液内药物含量对细菌的有效浓度、药物的吸收与排泄、疗效与毒性等问题的研究有关。尤其在新抗菌药物试制成功后，在开始应用于临床治疗前，更需要进行体液内药物浓度的测定，从而确定最适宜的用药剂量，以达到和维持血液及组织内有效药物浓度，确保其治疗效果。
一、异烟肼
1．原理 异烟肼（INH）与萘醌磺酸钠反应生成砖红色化合物，其在540nm处有最大吸收峰。根据其颜色的深浅，通过比色测定可计算INH的含量。
2．试剂
（1）9%硫酸锌。
（2）0．1mol／L NaOH溶液。
（3）0．1%萘醌磺酸钠溶液称取1，2－萘醌－4－磺酸钠0．1g，加蒸馏水60ml使其溶解，再加蒸馏水至100ml。
（4）INH标准储存液（1mg／ml）精确称取INH标准品100．0mg，置于100ml容量瓶中，加蒸馏水使其溶解，并稀释至刻度，4℃冰箱保存。
（5）INH标准应用液精确吸取INH标准贮存液10ml，置于100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。
3．方法
（1）按表6－1操作。
表6－1 血清INH比色法测定操作方法
（2）混匀后置沸水中煮沸5min，冷却后离心，分别吸取空白管、标准管及测定管上清液4．5ml，各加入0．1%萘醌磺酸钠溶液0．5ml，于暗处放置1h。
（3）用空白管调零，于540nm处测量标准管及测定管的吸光度（A）。
4．计算 INH（mg／ml）＝（A测÷A标）×0．05×1 000
5．注意事项 0．1%萘醌磺酸钠溶液应临用前新鲜配制。
二、对氨基水杨酸（PAS）
（一）三氯乙酸测定法
1．原理 PAS分子中芳香伯氨基可与芳醛如对二甲氨基苯甲醛在碱性溶液中生成橘黄色化合物，其在470nm处有最大吸收峰。在一定浓度范围内，其黄色深浅与PAS的含量呈线性关系，可测定其在470nm处的吸光度值确定其含量。
2．试剂
（1）10%三氯乙酸溶液。
（2）0．25mol／L NaOH溶液。
（3）对二甲氨基苯甲醛溶液：称取对二甲氨基苯甲醛3g，加入蒸馏水50ml，逐渐加入浓硫酸7ml，溶解后加蒸馏水至100ml。
（4）PAS标准储存液（0．2mg／ml）：精确称取PAS标准品20mg，置于100ml容量瓶中，以10%三氯乙酸溶液溶解并稀释至刻度。
（5）标准应用液（0．01mg／ml）＝精确吸取PAS标准储存液5．0ml置于100ml容量瓶中，以10%三氯乙酸溶液溶解并稀释至刻度。
3．方法 在离心管中加入全血0．3ml，滴入10%三氯乙酸4．2ml充分混匀，静置5min后离心沉淀，得无蛋白滤液。
（1）取试管3支，按表6－2操作。
表6－2 血液中PAS含量测定方法
（2）各管混匀后以空白管调零，在470nm处测定各管吸光度。
4．计算 PAS（mg／L）＝（A测÷A标）×200
5．注意事项
（1）磺胺类药物及其他氨基化合物可与二甲基苯甲醛反应而影响结果。
（2）本法亦可用于尿中PAS的含量测定。
（二）荧光测定法
1．原理 PAS在碱性溶液中经310nm激发光激发后可产生荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与含量呈线性关系，经荧光比色计测定可求出其含量。
2．试剂
（1）10%三氯醋酸溶液。
（2）硼酸盐缓冲液（pH 11）：取1mol／L NaOH 145ml，加硼酸钠8．58g，使其溶解后，再加蒸馏水至1．0L。
（3）PAS标准储存液（0．1mg／ml）：精确称取PAS标准品100mg，用蒸馏水溶解并稀释至1．0L。
（4）PAS标准应用液（0．1μg／ml）：吸取PAS标准储存液1．0ml，用蒸馏水稀释至1．0L。
3．方法 取血清0．1ml，加蒸馏水1．0ml，加10%三氯醋酸溶液0．25ml，置20min后，经每分钟3 000转离心15min。取上清液1．0ml，置入盛硼酸盐缓冲液1．2ml的试管中，于310nm激发后，以荧光光度计于400nm波长处进行测定。同时以PAS标准应用液及蒸馏水1．0ml经同样处理后，以试剂空白进行荧光测定。
4．计算 血清PAS（mg／L）＝（Fl测÷Fl标）×0．1（Fl荧光强度值）。
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