生物学检验

（一）无菌检查

无菌检查是保证药品注射液安全的重要检查项目之一。放射性药物大多数是注射液，因此要通过无菌检查。制品要达到检查的要求，主要采用2种方法，灭菌或除菌。对于热稳定性好的制品，可选用灭菌方法，否则可用除菌方法。灭菌方法有干热灭菌、湿热灭菌、环氧乙烷灭菌和γ射线辐射灭菌等，除菌方法大多采用膜过滤方法。干热灭菌即是在干燥箱中干热180℃、2h或250℃、30min，即可达到灭菌又可达到消除热原的目的，一般适用于玻璃容器及器皿的灭菌。湿热灭菌即是高压蒸汽灭菌，利用高压消毒锅，通常在121℃、30min达到彻底灭菌，但不能消除热原，通常也用于玻璃容器及器皿的灭菌。放射性药物制剂或原料药大部分用除菌的方法灭菌，即使溶液通过微孔滤膜，选择孔径为0．22μm滤膜，可有效地阻止微生物通过滤膜，不宜灭菌或即时标记的放射性药物，通常采用这种方法得到无菌溶液。即使是经过灭菌或除菌的放射性药物也还是要进行无菌检查，以确保制品中无活的微生物。经典的无菌检查法在《中国药典》中有详细介绍，此处不再赘述。无菌检查法的最大不足是，需要花费很长的时间（5～7d）用来等待微生物繁殖、生长，以使液体培养基变浊或固体培养基上出现菌落。因此这种方法非常不适合放射性药物，特别不适合短半衰期核素的放射性药物的无菌检查。发达国家《药典》均明确规定，无菌检查只是对制备工艺的确证，允许在无菌检查结果报告前发放制品。

（二）热原检查

热原（pyrogen）切勿理解为“热源”。药品注射液必须通过热原检查，以保证药品的安全。因为注射引起的发热、寒战、恶心、头痛、关节痛乃至休克等症状称热原反应，引起热原反应的物质称热原质亦称热原。热原的本质至今仍不清楚。但是现在已经清楚地知道，无论是热原还是内毒素，都没有直接的毒副作用，热原（内毒素）引起的毒副作用是间接的。注射到人体内热原，刺激外周血中单核细胞，产生一种称为“cytokine”物质，cytokine被血流运送到脑干，刺激体温中枢，引起热原反应。热原检查还没有一种好方法，1942年被美国药典收载的热原试验，是以家兔升温为测定指标，它除了具有反映哺乳动物升温的优点外，几乎没有别的长处，其灵敏性、重复性、经济性、简易性都很差。特别是随着制药工业的发展，有些药物本身会干扰正常家兔的体温，放射性药物就是其中之一。为此，1980年美国药典推出细菌内毒素试验（bacterial　endotoxin　test）很快为世界各国药典接受，中国也于1990年版药典中首先作为放射性药品热原检查的替代方法，近年来以内毒素检查的药品品种日益增多。它具有灵敏性高、重复性好、经济、简单、快速等优点，但是它的缺点是不直接代表体内升温反应，存在假阳性（即制品不合格，人体不一定出现热原反应），也存在假阴性，即内毒素以外的热原会被漏检（尽管这是极少数）。因此可以说，在药品检验方法学中，热原检查还没有真正解决。但最近已有报道，利用志愿者提供的全血与供试品保温，用酶标法测定产生的cytokine，为热原检查方法的研究展现出新的前景。

（三）生物分布

生物分布试验在放射性新药研究中，作为阐明药代动力学的一部分是必须报送的资料。在放射性药品的常规检验中也占有一定位置。如有些含99m锝［99mTc］放射性药物，放射化学纯度指标不能真正控制质量，例如99mTc－MAA，因为任何简便的放射化学分离分析方法，均无法将99mTc－MAA与99mTcO2分开，按照标准中规定方法测定的放射化学纯度的结果，实际上是两者之和，所以只好用生物分布试验来判断其质量。生物分布实验一般选用小白鼠若干只为实验材料，体重相近（20± 2g），分组或不分组由实验目的而定，给药途径应与药物的临床应用一致，给药剂量可根据测定仪器的灵敏度而定。给药后不同时间处死动物，取主要器官或组织的全部或一部分，称重或不称重后，测量各样品的放射性计数，并以给药剂量的放射性计数为100%，计算每克或全部器官或组织摄取该药的百分比。如上述99mTc－MAA，标准要求给3只小白鼠静脉注射一定剂量供试品，10min后杀死小鼠，取全部肺、肝，分别测量放射性，并与注射剂量相比计算肺、肝摄取百分比。若3只小鼠中有2只以上肺摄取不低于80%，肝摄取不超过5%，即认为该批99mTc－MAA生物分布符合规定，否则不符合规定。如果用大动物（兔、犬或灵长类）可采用全身显像，勾画出感兴趣区，计算各器官摄取放射性的百分数，可达到在同一个体、不同时间的生物分布结果，这在筛选放射性药物的研究中是很有用的试验方法。

（四）生物活性

有些放射性药物具有特定的生物活性，当这些活性物质被标记了放射性核素后，其生物活性不应改变。对于这些药物，除应进行放射性药物通常的检验外，还要对特定的生物活性进行检验。其检验方法与未标记放射性核素的生物活性物质相同，并尽可能将标记与未标记的样品在相同条件下进行比较试验。

（五）其他

毒性、药代动力学、一般药理、药效学以及医学内辐射吸收剂量（MIRD）等试验，只是在新药研究时，按照新药研究要求进行实验，在常规药品检验时均不要求。