菌种质量鉴定与保藏

一、菌种鉴定

1.外观鉴定

（1）母种外观鉴定。优质母种外观鉴定的标准见表1-7。

表1-7 优质母种外观鉴定的标准

续表

（2）原种、栽培种外观鉴定。用手抓住棉花塞轻轻提起，看棉花塞或皮套松紧是否适度；随机抽样检查，把棉花塞拔起后，用鼻子嗅菌种气味，若菌种中散发出酸、霉、臭等气味，则说明菌种被杂菌污染；看菌种外观是否破瓶、破袋，再看菌种是否纯度高，菌丝色泽要正，多数种类的菌丝应纯白，原种、栽培种菌丝应连结成块，无老化、变色、吐黄水等现象；菌丝要粗壮，长势强，分枝多而密；菌种要湿润，含水适宜，不干缩脱壁。

2.液体鉴定 在2%蔗糖水中接种待鉴定菌种，如培养后出现浑浊或稀薄现象，说明该菌种不可用于栽培；如培养结果为洁白的菌丝球，该菌种可以放心用于生产。

3.出菇试验 大规模生产前，进行出菇试验，是保证生产成功的重要方面。也只有出菇试验，才能够最终直观地体现菌种质量情况。

出菇试验步骤见图1-19。

二、菌种保藏

菌种保藏的方法很多，通常采用的手段是低温、干燥和减少氧气供应，这里介绍比较常用的斜面低温保藏、液体石蜡保藏和液氮超低温保藏方法。

图1-19 出菇试验步骤

1.斜面低温保藏 将加富PDA培养基的琼脂用量增加到25g／1000ml，用18mm×180mm试管装营养液12ml，斜面长度为试管长度的1／2，常规接种，培养至菌落接近长满整个培养基斜面时，按照无菌操作将棉塞换成橡胶塞，并用石蜡封口，放入4～5℃冰箱内保存。每隔3～6个月转管一次。草菇菌种不耐低温，保存温度应提高到10～15℃。

2.液体石蜡保藏 将生长健壮的母种按照无菌操作，将灭菌的液体石蜡灌注至斜面上方1cm处，同样用无菌橡胶塞和石蜡封口。常温下可保藏5～7年。使用时，用接种针从液体石蜡浸泡的斜面上挑取菌丝接种到适宜的母种培养基上，余下的母种可继续保藏。由于第一次转接的菌丝沾有石蜡，生长微弱，因此必须再转接一次才能恢复正常生长状态。

3.液氮超低温保藏 利用液氮罐，在-196℃的低温条件下保藏菌种10年左右，是目前最理想的菌种保藏方法，但是价格昂贵，需要专人维护，适合科研院所使用。

具体的操作方法是，采用10%（体积比）的无菌冷冻保护剂如甘油蒸馏水溶液，淹没母种培养基斜面，按照无菌操作轻轻刮落斜面上的菌丝体，使其成悬浮液。将0.5～0.8ml悬液按照无菌操作注入无菌的安瓿管中，熔封瓶口，检查不漏气后，置液氮冷却器内，以每分钟下降1℃的速度缓慢降温至-35℃，以后冻结速度不需控制，迅速降低到液态-150～-196℃进行长期保藏。

提个醒

购买合格菌种应具备以下条件：

菌种种类、品种名称、菌种级别、代时、生产厂家、接种日期。