一、实验目的
1.1 掌握比色法测定土壤速效磷的方法，了解土壤中磷元素形态及其土壤供磷能力与土壤速效磷的关系。
1.2 掌握土壤速效磷的浸提，浸提液的处理，标准曲线制作，显色，比色，计 算。
二、实验原理
用0.50 mol/L碳酸氢钠溶液浸提土壤有效磷。碳酸氢钠可以抑制溶液中Ca2+的活度，使某些活性较大的磷酸钙盐被浸提出来；同时也可使活性磷酸铁、铝盐水解而被浸出。浸出液中的磷不致次生沉淀；可用钼锑抗比色法测定。测定值与作物对磷肥反应的相关性高。
三、试剂和溶液
分析中仅能用蒸馏水或相当纯度的水。
3.1 碳酸氢钠（GB640，分析纯）。
3.2 氢氧化钠（GB629，化学纯）：50%（m/V）溶液。
3.3 活性炭（HG3-1290，化学纯）。
3.4 盐酸（GB622，化学纯）：1＋1溶液。
3.5 钼酸铵（GB657，分析纯）。
3.6 硫酸（GB625，分析纯）。
3.7 酒石酸氧锑钾［K（SbO）CHO·1HO，分析纯］：0.30%（ m/V）溶液。
44622
3.8 抗坏血酸（C6H8O6，左旋，比旋光度＋21～＋22°，分析纯）。
3.9 磷酸二氢钾（GB1274，分析纯）。
3.10 浸提剂（0.50 mol/L NaHCO3，pH＝8.5）。将42.0 g碳酸氢钠（3.1）溶加入800 mL水中，稀释至1 L，用氢氧化钠溶液（3.2）调节pH至8.5（用pH计测定）。贮存于聚乙烯或玻璃瓶中，用塞塞紧。如贮存期超过20 d，使用时必须检查并校准pH。
3.11 无磷活性炭粉：如果所用活性炭（3.3）含磷，应先用1＋1盐酸（3.4） 浸泡12 h以上，然后移放在平板漏斗上抽气过滤，用水淋洗4～5次，再用浸提剂（3.10）浸泡12 h以上，在平板漏斗上抽气过滤，用水洗涤碳酸氢钠，至无磷为止，烘干备 用。
3.12 钼锑贮备液：10.0 g钼酸铵（3.5）溶于300 mL约60 ℃的水中，冷却。另取181 mL硫酸（3.6）缓缓注入约800 mL水中，搅匀，冷却。然后将稀硫酸注入钼酸铵溶液中，随时搅匀；再加入100 mL酒石酸氧锑钾溶液（3.7）；最后用水稀释至2 L，盛于棕色瓶。
3.13 显色剂：0.50 g抗坏血酸（3.8）溶于100 mL钼锑贮备液（3.12）中。此试剂有效期在室温下为24 h，在2～8 ℃冰箱中可贮存7 d。
3.14 磷标准贮备液［c（P）＝100 mg/L］：称取105 ℃烘干的磷酸二氢钾（3.9）0.4394 g，溶于约200 mL水中，加入5 mL硫酸（3.6），转入1 L容量瓶中，用水定容。此贮备溶液可以长期保存。
3.15 磷标准液［c（P）＝5 mg/L］：将磷标准贮备液（3.14）用浸提剂（3.10）准确稀释20倍。此溶液不宜久存。
四、仪器和设备
4.1 土壤筛：1 mm方孔筛；
4.2 分析天平：感量为0.01 g；
4.3 锥形瓶：50和150 mL，带橡皮塞；
4.4 漏斗：7 cm；
4.5 滤纸：11 cm，不含磷；
4.6 移液管：5、10和20 mL；
4.7 吸量管：5 mL；
4.8 量筒：50 mL；
4.9 容量瓶：50 mL；
4.10 分光光度计：可在880 nm波长处测读吸光度；
4.11 恒温往复振荡机，或普通往复振荡机及25±1 ℃的恒温室。振荡频率约180 r/min，但150～250 r/min的振荡机都可使用。
五、测定步骤
5.1 土壤有效磷的浸提
称取通过1 mm筛的风干土样2.50 g，置于干燥的150 mL锥形瓶中，加入25±1 ℃的浸提剂（3.10）50.0 mL，用橡皮塞塞紧，在25±1 ℃的液温下，于往复振荡机上振荡30±1 min，立即用无磷滤纸过滤入干燥的150 mL锥形瓶 中。
5.2 滤出液中磷的测定
在浸提土样的当天，吸取滤出液10.00 mL1）（含1～25 μgP） 放入干燥的50 mL锥形瓶中，加入显色剂（3.13）5.00 mL，慢慢摇动，使二氧化碳逸出。再加入10.00 mL水，充分摇匀，逐尽二氧化碳。在室温高于15 ℃处放置30 min后，用1 cm光径比色槽2）在880 nm波长处比色3），测读吸光度，以空白溶液［10.00 mL浸提剂（3.10）代替土壤滤出液，同上处理］为参比液，调节分光光度计的零点。
注：1）如果土壤有效磷含量较高，应改吸取较少量的滤出液，并加浸提剂（3.10）补足至10.00 mL后显色。
2）比色溶液中的磷浓度很低时，可与标准系列显色溶液（5.3）一起改用2或3 cm光径比色槽比 色。
3）如果没有880 nm波长的分光光度计，而滤出液的颜色又较深，或滤出液显色后浑浊，可改在土壤浸提振荡30 min后，在过滤之前，向土壤悬浊液中加入0.3～0.5 g活性炭粉（3.11），摇匀后立即过滤，在比色时可用660～720 nm波长或红色滤光片比 色。
5.3 校准曲线的绘制或线性回归方程的计算
在土样测定的同时，吸取磷标准液（3.15）0、1.50、2.50、5.00、10.00、15.00、 20.00、25.00 mL，分别放入50 mL容量瓶中，并用浸提剂（3.10）定容。此标准系列溶液中磷的浓度依次为0、0.15、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50 mg/L。P吸取标准系列溶液各10.00 mL，同上（5.2）处理显色，测读系列溶液的吸光度。然后以上述标准系列溶液的磷浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标绘制校准曲线，或计算两个变量的直线回归方程。
六、结果表示
6.1 计算
土壤有效磷含量X（P，mg/kg）按下式计算：
X＝c×20
式中：c ——从校准曲线或回归方程求得土壤滤出液中磷的浓度，单位为mg/kg P；
20 ——浸提时的液土比。
注：如果定量磷时吸取滤出液少于10 mL，则测定结果必须再乘以稀释倍数（10/吸取滤出液体积，单位为mL）。
6.2 精密度
a. 取平行测定结果的算术平均值为测定结果。
b. 平行测定结果的允许差。
七、思考题
7.1 影响土壤有效磷浸提的因素有哪些？
7.2 用0.5 mol/L 碳酸氢钠作提取剂有何优点？
7.3 钼锑抗混合剂有何作用？为何要现配现用？如何配制？
7.4 显色时温度一般是多少？如室温偏低，对结果有何影响？应如何处理？
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
