脱毒苗繁殖

二、脱毒苗繁殖

（一）材料的选择和处理

首先，根据农业生产和市场导向，选择有经济效益和实用价值的品种。

其次，将选好的品种采用秋季播种（尽量避过生育期有高温出现），缩短生育期，不管品种生育期长短，一般都要求生长60～70天的无病害薯块。将收获的马铃薯存入15℃～20℃的窖中自然打破其休眠期，在薯块芽有白质点时放于通风透气、温度20℃～22℃的条件下使其发芽。

（二）脱毒苗的制取

首先，将发芽的薯块放于散射光下使其芽顶成绿色。

其次，从薯块上将绿芽搬下，切下0.5～1厘米芽尖用自来水洗1～2分钟，用无菌水冲洗1～2分钟，然后浸入75%的酒精中30～40秒（不能用次氯酸钠和氯化汞）进行灭菌处理，随后再用无菌水冲洗3～5次，置于无菌滤纸上吸干水分，在无菌条件下于解剖镜下剥取带一个叶原基的茎尖生长点（0.2～0.5毫米）并迅速接入组织脱毒培养基中。通常将三角瓶置于22℃～25℃，光照强度2500～3000勒克斯，光照时数14～18小时的条件下培养，25～30天后可看到伸长小茎，叶原基形成可见小叶，此时及时转如无生长调节剂的培养基中。30～50天后即能发育成3～4个叶片的苗子。以单株为系重复以上制取过程3～4次。最后将形成的苗子以单株按单节切段进行扩繁，每隔15～20天扩繁一次。

已经明确引起种薯退化、减产的主要病毒有PVY、PVX、PVS和PLRV。茎尖脱毒结合病毒检测获得脱毒苗，进而生产脱毒种薯是解决既有品种受病毒危害的唯一有效方法。对PVY和PLRV容易脱除，对PVX和PVS则不易脱除，实践证明茎尖脱毒前进行热处理，即将要脱毒品种的块茎催芽后，经4～6周36℃的热处理后，再进行茎尖组织培养脱毒，可提高PVX和PVS的脱毒率67%。另一个与脱毒率有关的因素是剥离的茎尖大小，只带一个叶原基、0.1～0.2毫米的茎尖可显著提高脱毒率。茎尖发育成苗后，进行病毒检测，目前用于病毒检测的抗血清可检测PVX、PVY、PVS、PVA、PVM和PLRV。

最后，以单株为系进行扩繁，苗数达150～200株时，随即抽取3～4个样本，每个样本为10～15株进行ELISA（酶联疫吸附检验）血清学方法和指示植物鉴定法病毒检测。通过鉴定，带有病毒的株系淘汰，不带病毒的作为基础苗进行扩繁。

（三）脱毒苗的快速繁殖

脱毒苗的快速繁殖分为基础苗繁殖和生产苗繁殖两个过程。

一般情况下，基础苗的繁殖要求相对高温、弱光照，使其节间距拉长，木质化程度相对较低，以利于再次繁殖早出芽及快速生长，加快总体繁殖系数。

表5-1　马铃薯脱毒苗繁殖培养基

其具体条件为：培养温度25℃～27℃，光照强度为3000～4000勒克斯，光照时间为10～14小时，并采用人工光照培养室进行培养。在每一代快繁中，切断底部（根部）的脱毒苗转入生产苗进行繁殖，其他各段仍作为基础苗再次扦插。

生产苗的繁殖要求相对低温，强光照使苗壮、茎间短、木质化程度高，这一结果利于栽植，且成活率高。

具体条件为：为培养温度22℃～25℃，光照强度为3000～4000勒克斯，光照时间为14～16小时，采用自然光照室进行培养。20～25天为一周期，待苗长出5叶大约5厘米以上，从培养室取出打开盖顶，在室外锻炼4～6天即可移栽。