食用菌菌种分离及接种技术

第四节　食用菌菌种分离及接种技术

一、什么是菌种分离

菌种分离就是通过无菌操作技术将食用菌的繁殖材料从菌体组织或其他基质内分离出来，并提纯、培养得到纯正菌丝体的过程。可见，菌种分离是食用菌制种扩繁的初端。

二、菌种分离的方法

菌种分离的方法有三种，即孢子分离法、组织分离法、菇木分离法。其中组织分离法最为常用，现就组织分离法说明其操作步骤如下。

首先，选取优良干净的种菇。

其次，在接种箱内或超净工作台上用0.1%的升汞或75%的酒精擦拭种菇表面予以消毒。

第三，将经过消毒的种菇用事先制备好的无菌水冲洗数次，冲洗次数越多，效果越好。

第四，用无菌滤纸吸干种菇表面水分。

第五，无菌切割，切取约0.5立方厘米的组织块接种，不同菇类切取的组织部位有所不同，但多数菇类宜在菌盖与菌柄的交界处切取。

组织分离法操作简便，属于无性繁殖，能保持原菌株的优良性状，但其最大的缺点是易带病毒。

三、接种技术

（一）无菌操作规程

第一步，接种前对接种室（箱）进行清洁、消毒灭菌，并准备好接种工具。

第二步，将待接种的培养基放入接种箱内，并用紫外线照射30分钟，然后保持15分钟黑暗。

第三步，洗手后进入缓冲间，穿上经消毒灭菌的工作服，并将菌种带入接种箱内。

第四步，用75%的酒精擦拭双手、菌种容器壁、工作台面及接种工具。

第五步，点燃酒精灯开始接种。

（二）接种方法

1.母种接种　将母种试管及母种培养基放于左手心，并用拇指压住试管，右手持接种工具在酒精灯火焰上灼烧，约10秒钟后（首次可烧至发红），再以右手的小拇指及无名指会同手掌在酒精灯火焰上方拿出试管口棉塞，并将管口在火焰上灼烧3～5秒，接着将经灼烧的工具伸入母种试管内，贴近管壁冷却，然后挑取黄豆粒大小的一块菌种（必须带有培养基）迅速地接入空白培养基，最后在火焰上方将棉塞微燎后封住管口，如此重复。

图1-9　试管母种的接种操作

2.原种接种　原种培养基容器大，手持不便，需借助一支架固定，可将原种培养基瓶口棉塞拔出用右手小拇指及手掌拿住，将培养基横放于支架上并用火焰封口，左手持母种试管在火焰上方拔掉棉塞，用接种工具挑取母种接入原种培养基，将棉塞微燎后塞封原种瓶口，如此重复。

图1-10　原种接种操作

1.手持母种接种　2.试管架固定母种接种

3.栽培种接种　原种扩接栽培种，需将原种及栽培种培养基均放于固定支架上，用酒精灯火焰封住原种瓶口及培养基瓶口，也可两人合作，一人负责栽培种培养基瓶口的打开及塞封，一人手持原种瓶接种。

图1-11　栽培种接种

（三）接种注意事项

第一，接种前准备好一些经过灭菌的封口物，一起放于接种箱内，以便原封口物需要更换时加以更换。

第二，接种时切勿使管口、瓶口离开火焰上方的无菌区。

第三，防止接种工具烧伤菌种。

第四，接种室内人员尽量少走动、少说话，以减少空气流动。

第五，接种完毕，应及时粘贴菌种标签。

第六，接种后及时清理接种室及接种箱，以免滋生污染源。

四、菌种培养

无论是培养箱还是培养室，都要为菌种的生长创造适宜的环境条件，包括温度、湿度、空气、光照等，要按照不同种类及品种的要求进行培养。在培养期间要经常检查生长情况，有无杂菌感染及病虫发生，一旦发现有杂菌感染及病虫害则要及时剔除、清理、防止扩散，以免造成大量污染或者潜伏下隐患。