一、抗生素贮存液
1.青霉素G(钠盐) 配制成10000IU/ml,使用时使最终浓度为100IU/ml,即100ml培养液(或维持液)内加1ml。
配制方法:用无菌去离子水(或双蒸水)溶解青霉素;分装后在-20℃冰冻保存。
2.链霉素(硫酸盐) 配制成10000μg/ml,使用时最终浓度为100μg/ml,即100ml培养液(或维持液)内加入1ml。制备的方法步骤同青霉素G。
3.庆大霉素:注射用硫酸庆大霉素80000IU×5,灭菌双蒸水70ml,混合后成为5000IU/ml,小瓶分装保存于4℃,使用时按总量的1%加入试液中。
4.制霉菌素(Nystatin) 这类抗生素几乎不溶于水,故配制成5000IU/ml的悬液,使用时最终浓度为25IU/ml,即每ml培养液(或维持液)内加0.5ml。
配制方法:用无菌去离子水悬混抗生素;分装后置-20℃冰冻保存。
5.氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25~50μg/ml的终浓度添加于生长培养基中。
6.羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25~50μg/ml的终浓度添加于生长培养基中。
7.甲氧西林(methicillin)(100mg/ml) 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5μg/ml终浓度与100μg/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基中。
8.卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml) 溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10~50μg/ml的终浓度添加于生长培养基中。
9.氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解250mg氯霉素于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5~25μg/ml的终浓度添加于生长培养基中。
10.四环素(tetracyyline)(10mg/ml) 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10~50μg/ml的终浓度添加于生长培养基中。
11.萘啶酮酸(nalidixicacid)(5mg/ml) 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15μg/ml的终浓度添加于生长培养基中。
二、1%酚红溶液
配制方法:酚红在乳钵内加少量1mol/L NaOH,研磨使其完全溶解,NaOH加得越少越好;加去离子水至100ml;高压消毒,在室温或4℃贮存。
三、NaHCO3溶液
配制方法:将NaHCO3溶解在去离子水中;加压过滤除菌;用密闭小瓶分装,4℃贮存,每瓶最好一次用完。
四、1mol/L NaOH液
配制方法:将NaOH溶解于去离子水中;高压消毒,注意不能用橡胶或铅制瓶塞;在室温或4℃贮存,堵紧瓶塞避免CO2进入,新鲜配制为好;配制0.1mol/L NaOH时,将1mol/L NaOH用去离子水稀释10倍。
五、Hank’s溶液
10倍Hank’s母液的制备。
配制方法:依次在去离子水中溶解上述成分;将B液慢慢地加到A液中,同时不断搅拌;然后加入C液;加去离子水到1000ml;加压过滤除菌(或0.053MPa高压蒸气消毒25~30min);4℃贮存;应用前每1000ml使用液中加1.4% NaHCO3溶液25ml。
六、Earle’s液
10倍Earle’s母液的制备。
配制方法:依次在去离子水中溶解上述成分;将B液慢慢加到A液中,同时不断搅拌,然后加入C液(酚红);加去离子水到1000ml;加压过滤除菌(或0.053MPa高压蒸气消毒25~30min);4℃贮存;应用前每1000ml使用液中加4.4% NaHCO3溶液25ml。
七、磷酸盐缓冲盐溶液(PBS):使用液(pH7.3)
配制方法:按上述次序将盐类在去离子水中溶解;A和B液分别高压灭菌;冷却后A液和B液混合(注意无菌操作);分装,室温或4℃贮存。
八、无钙、镁磷酸缓冲液:使用液(pH7.3)
配制方法:按上述次序将各成分在去离子水中溶解;分装,高压灭菌;室温或4℃贮存。
九、Tris(三羟甲基氨基甲烷[Tris(hydroxymethyl)Aminomethane])缓冲液
此缓冲液用在少用或不用NaHCO3的细胞培养中,其优点在于可不必用CO2培养箱,pH值范围在7.0~9.0(7.5~8.5最稳定),低于7.0以下无效。经过改良的Gey氏盐溶液将Tris制备成0.05mol/L(pH7.6)的母液,使用时最终浓度为0.002~0.02mol/L。
按上述次序在去离子水中溶解各种成分,此即为10倍浓缩母液,4℃贮存,用时用去离子水稀释10倍,高压消毒,室温或4℃贮存。
配制方法:依次在去离子水中溶解各成分;高压消毒;室温或4℃贮存。
0.05mol/L Tris缓冲液的制备:①取20ml B液加到360ml A液中,即为改良的Gey氏溶液;②取2.42g Tris溶解在约100ml的上述溶液中;③加76.8ml 0.2mol/L HCl到②中(0.2mol/L HCl需事先配制);④加①到②中,使总量到400ml,此即为0.05mol/L Tris缓冲液,pH值为7.6;⑤过滤除菌分装,4℃贮存。
十、水解乳蛋白液
配制方法:将水解乳蛋白加到Hank’s溶液中,加热到56℃直至溶解;分装,高压灭菌;室温或4℃贮存;用前将50ml此溶液加入1ml的1mol/L NaOH溶液中和。
十一、胰酶(Trypsin)
配制方法:加胰酶和抗菌素于Hank’s液中,震荡使其溶解;加压过滤除菌,分装,-20℃冰冻贮存;一瓶最好一次用完,不宜反复冻融。
十二、胰酶-乙二胺四乙酸二钠(Trypsin-Versene)
配制方法:加胰酶,乙二胺四乙酸二钠和抗生素于无钙镁磷酸缓冲液中震荡使其完全溶解;加压过滤除菌,分装,-20℃冰冻贮存;一瓶最好用一次,不宜反复冻融。
十三、乙二胺四乙酸0.02%溶液(Versene,pH值7.3)
配制方法:将乙二胺四乙酸溶解于无钙镁磷酸缓冲液中;分装,高压消毒;放4℃保存。
十四、谷氨酢酰胺溶液
配制方法:溶于400ml去离子水中;加压过滤除菌;分装成50ml;-20℃贮存。此液不加在母液里,在配使用液(即生长液或维持液)时加入。
十五、细胞冷藏保存液
配制方法:用无菌操作法依次加入上述试剂;分装,堵紧瓶塞,4℃贮存。
十六、血清
组织培养用的血清种类很多,其中有小牛血清、胎牛血清、马血清、兔血清、人血清等,一般从已禁食24h的动物血液分离获得。如用小牛血清则以不吃过母乳的小牛为佳。
配制方法:无菌操作采血,室温凝固;从玻璃瓶壁剥离血块,在4℃冷过夜,使血块尽量收缩;吸出血清,离心沉淀,3000r/min,15min;收集上清加压过滤除菌;分装,56℃30min加热(有时也可不灭活);-20℃冰冻贮存,每瓶血清最好一次用完。
十七、pH值调整液
在许多情况下,为了营养成分稳定和延长贮存时间,配制溶液时,都不预先加入NaHCO3,而在使用前加入。为了保持培养液pH值恒定,以利于细胞的生长和增殖,还可用HEPES[N-(2hydroxyethl peperazine-ethanesulphonicacid)]作添加剂。
1.NaHCO3 常以浓度为7.5%,5.6%和3.7%三种调整pH值。用灭菌去离子水(或双蒸水)配制,分装,4℃保存。当pH值超过后,可用高压灭菌的10%醋酸溶液或通入CO2调节。
2.HEPES 为了能在较长时间控制恒定的pH值范围,可以使用氢离子缓冲液。HEPES就是其中的一种,它具有较强的缓冲能力。使用最终浓度为10~50mmol/L,可根据缓冲能力的要求而定。
3.HEPES的配制 HEPES可按照所需的浓度,直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌。通常配制成50mmol/L的浓度。用200ml双蒸水溶解47.6g HEPES,用lmol/L NaOH调节pH值至7.5~8.0。过滤除菌后,分装,4℃保存。
免责声明:以上内容源自网络,版权归原作者所有,如有侵犯您的原创版权请告知,我们将尽快删除相关内容。