分子生物学试剂的配制

第六节　分子生物学试剂的配制

一、0.5mol/L EDTA溶液（pH8.0）

配制方法：先将EDTA倒入800ml水中，用磁力搅拌器剧烈搅拌；用NaOH调pH值（约20g的NaOH），定容至1L；分装，高压消毒灭菌。

二、5mol/L NaCl溶液

分装，高压灭菌，4℃保存

三、1mo1/L MgCl₂溶液

四、3mol/L乙酸钠（pH5.2）

配制方法：先将乙酸钠溶于800ml去离子水中；用冰醋酸调pH到5.2，定容至1L；分装，高压灭菌。

五、1mol/L DTT（二巯苏糖醇）

过滤除菌，每管1ml，－20℃保存。

六、β－巯基乙醇（BME）

市售BME原液约14.4mol/L，置4℃保存于棕色瓶中。

七、10% SDS（十二烷基硫酸钠盐）

配制方法：先将SDS溶于800ml去离子水中；置68℃水浴中溶解，加数滴浓盐酸调pH值到7.2；定容至1000ml，分装，室温保存。

备注：称SDS时要戴口罩，10% SDS不必灭菌。

八、1mol/L乙酸镁

过滤除菌。

九、5mol/L乙酸铵

过滤除菌。

十、5mol/L乙酸钾

60ml的5mol/L KAc加入11.5ml冰醋酸和28.5mlH₂O所配成的溶液。

十一、20倍SSC

用适量水溶解盐类，加入几滴10mol／L NaOH调pH值至7.0，定容，分装高压灭菌。

十二、20倍SSPE

用适量水溶解盐类，10mol/L NaOH（约6.5m1）调pH值至7.4，定容，分装高压灭菌。

十三、溴化乙锭（10mg/m1）

将EB置Eppendorf管中，涡旋混合，确保完全溶解，Eppendorf管包以锡纸，4℃保存。EB是强诱变剂，称取时必须戴手套和口罩。

十四、100% TCA（三氯乙酸）

十五、不同pH值的TE

十六、SET（或称TNE）溶液

溶液中含10mmol/L pH8.0的Tris－HCl，100mmol/L的NaCl和lmmol/L pH8.0的EDTA。

十七、50倍Denhardf溶液

过滤，25ml分装，－20℃保存。

十八、常用电泳缓冲液

1.10倍TBE（Tris－硼酸盐）缓冲液

调pH值到8.2

2.10倍TPE（Tris－磷酸盐）缓冲液

3.10倍TAE（Tris－乙酸盐）缓冲液

调pH到8.2，室温保存。

4.0.025mol/L Tris－0.192mol/L Gly缓冲液（pH8.5）

十九、常用凝胶加样缓冲液

1.6倍类型1　0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯腈蓝、40%（w/v）蔗糖水溶液。4℃贮存。

2.6倍类型2　0.25%溴酚蓝、40%（w/v）蔗糖水溶液。4℃贮存。

3.0.5mol/L Tris－HCl甘油液

二十、制备不同浓度聚丙烯酰胺的配方

二十一、4倍凝胶缓冲液（Tris－HCl pH8.9）

二十二、30%丙烯酰胺溶液

二十三、10%过硫酸铵（AP）

最好临用时配制；4℃保存一周，－20℃保存可用一个月。

二十四、AgNO₃（0.011mol/L）溶液

二十五、NaOH－甲醛溶液（0.75～0.1mol/L）

二十六、5%冰醋酸（固定液）

二十七、1%琼脂糖或1%琼脂

二十八、氯仿－异戊醇（24∶1）

二十九、熏蒸饱和酚

配制方法：加热68℃去离子水饱和熏蒸酚；加入8－羟基喹啉（100g酚加0.1g），使酚变为黄色；用等体积1.0mol/L pH8.0Tris缓冲液抽提，再用0.1mol/L pH8.0含0.2%β－巯基乙醇的Tris缓冲液抽提数次，酚溶液的pH值应大于7.6；此酚溶液在平衡缓冲液覆盖下4℃可保存一个月；纯化和制备酚溶液都要戴手套，以免损伤皮肤。

三十、培养基

1.液体培养基

NaOH调pH到7.5，配成1000ml。

NZYM培养基NZCYM培养基中省去酪蛋白水解物。

NaOH调pH到7.5配成1000ml。

调pH到7.4高压灭菌，凉后添加：

（4）M9CA培养基1L M9培养基中加入2g酪蛋白水解物即为M9CA培养基。

高压锅灭菌，凉后添加：

（MgCl₂单独高压灭菌，其余分别过滤除菌）

加水900ml，KOH调pH到7.5，高压灭菌，凉后添加1mol/L MgSO₄ 20ml，加入无菌水到1000ml。

2.固体培养基上述这些培养基中，在灭菌前加琼脂或琼脂糖便成为固体培养基；每1000ml中加入琼脂或琼脂糖：

说明：试剂过滤除菌可用0.2μm或0.45μm的滤膜滤器。