细菌的快速鉴定方法

第六节　细菌的快速鉴定方法

传统的鉴定方法不仅过程繁琐，费时费力，且在结果的判定、解释等方面易发生主观片面而引起错误，难以进行质量控制。

细菌的快速鉴定方法是对微生物的研究采用了物理的、化学的分析方法，借助许多自动化仪器，根据细菌不同的生物学性状和代谢产物的差异，逐步发展起来的微量快速培养基和微量生化反应系统，使原来缓慢、繁琐的手工操作变得快速、简单，并有可能实现自动化和机械化。下面对几种快速鉴定方法作一简单介绍。

一、微生物数字编码分类鉴定法

（一）数码分类鉴定法原理

细菌数码鉴定的基本要点是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。数据库是由细菌条目组成的，每个条目可代表一个细菌种或一个细菌生物型；有些单靠生化反应无法将属内细菌明确区分的，条目可代表细菌属，可用血清学试验等进一步鉴定。每个条目包括着多种单项生化反应。系统中各种种类的细菌有各自相应的数据库，可鉴定出不同数目的细菌。鉴定即通过试剂条中的生化试验将一种（组）细菌与其他细菌相互鉴别，并用百分率（%）表示每种菌的可能性。

将所得生化反应模式转换成数学模式，可把某种菌的全部生化反应结果快速转录成数字，编成数码检索表，此过程叫编码。经查阅检索表又可将该数字（编码）转化成细菌名称。

编码的原则是将20个生化反应的阴阳性结果（以＋/－为标志）信息编为一组数字。具体做法是，将全部反应每3个为一组、每个组的第一位反应阳性时记作1，第二位反应阳性时记作2，第三位反应阳性时记作4，各种反应阴性时均记作0。再将每组3个反应得出的3个数字相加成一个数字，结果可能为0～7的任何一个数字。

以API20E为例，反应条中有20个试验，附加氧化酶试验为21个试验，试验结果应为7位数字。例如，某一待检菌试验结果为5144512，经查阅检索本，数码为5144512的细菌判定为大肠埃希氏菌。

（二）数码分类鉴定系统的组成和操作

1.数码分类鉴定系统的组成：由试剂条（板）、添加试剂及检索工具配套，形成完整的微生物鉴定体系。

（1）试剂条：由20个内装生化基质液的小管或反应杯组成。它们是选择识别力最强的生化反应优化组合的。常用的生化反应有发酵试验、同化试验、同化或发酵抑制试验、酶试验及其他传统的生化反应。

（2）添加试剂：有些试验经孵育后需添加试剂才能呈现颜色变化。添加的试剂有配套试剂盒或单种试剂。

（3）检索工具：检索工具包括鉴定表、编码本和电脑软件，可供人工查阅鉴定结果或由电脑自动处理并报告。

2.数码分类鉴定的操作程序

（1）准备：主要工作包括标本处理（必要时使用运送培养基及进行细菌的分离培养等），预试验（如革兰氏染色、镜检等），菌落的选择（挑选可疑致病菌的特征性菌落）。

（2）接种：制备细菌悬液，挑取1个或多个菌落，按不同要求用蒸馏水或生理盐水制备细菌悬液，并根据试验条的要求制备成一定浓度的细菌悬液接种。

（3）观察及记录结果：接种后的试剂条一般经35℃～37℃孵育18～24h可观察结果。多数试验可用肉眼直接观察颜色变化判定，有些试验需添加不同的试剂后方出现颜色变化，有些试验需在紫外灯下观察荧光现象判定。

（4）结果的解释：将生化反应的“＋”、“－”结果按3个一组（1、2、4）得出一组7位数的数码，查阅编码本上与之对应的细菌条目即可得出解释。使用电脑分析软件时可手工输入肉眼观察得到的“运算符”结果或用配套的读数仪与电脑联机，“半自动地”得到鉴定的结果。

二、微生物自动鉴定及统计系统

本鉴定方法是应用计算机自动地对系统所完成的鉴定样本及药敏试验等作出统计和组成多种统计学报告，使用者可随时根据需要调出报告。

其工作原理是系统采用数码分类法鉴定。

全系统结构包括充液／封口部件（将制备好的菌悬液的试管和试卡输入完成接种）、读数器/孵箱（直接由计算机控制孵箱，并分别为各试卡读数）、计算机（包括终端和键盘）、打印机、测试卡（即各种试验用途的指示卡）。

主要操作步骤是开机后书写测试卡（即把卡片上要进行的试验项目右上角○处涂黑●），然后把配制好的菌悬液置于试管架上，放接种仓充液接种，输入流行病学和标本资料。待试验完毕（不同细菌所需时间不同，一般3～6h或10h），卡片完成鉴定和药敏测试后，系统可自动打印实验室报告单。

三、其他快速鉴定方法

1.全自动免疫诊断系统本系统全部由计算机控制自动完成分析全过程。可直接从病人或病兽标本中检测细菌、病毒、弓形体、衣原体和螺旋体等微生物的抗原、抗体或毒素。

其基本原理是采用酶联免疫方法并在底物中掺入荧光物质使产生荧光产物——4－甲基7－羟刀豆素，荧光强弱与标本中被测物浓度相关，经扫描样本读数与标准比较，计算出标本值并根据阴性和阳性临界值判断测定标本结果。

主要操作步骤是标本经过前处理后，加入样品孔，放入试剂（随机携带的），从键盘输入病人或病兽样本资料，待测试完成后，系统自动打印出报告。

2.血培养自动化分析主要用于快速和准确地诊断细菌侵入血流时引起的菌血症和败血症。

工作原理是根据细菌生长繁殖时产生CO₂，通过各种手段检测细菌生长繁殖时产生的CO₂来判断阴阳性。

主要操作方法是无菌采集血液后立即注入装有液体培养基的培养瓶中，放入主机的培养箱中孵育，仪器就会自动检测、处理数据，阳性血培养瓶就被检出。

以上介绍的快速鉴定方法，每种方法都有许多系列的产品（机器系统）作为商品出售，这里不作详细介绍。