生殖器寄生虫检验技术

第三节　生殖器寄生虫检验技术

一、牛胎毛滴虫检查法

（一）病料采集

牛胎毛滴虫存在于病母牛的阴道与子宫的分泌物、流产胎儿的羊水、羊膜或其第四胃内容物中，也存在于公牛的包皮鞘内，检查时应采取以上各处的病料寻找虫体。

检查以能见到运动活泼的虫体为准，故在采集病料时必须尽可能地避免污染，以免其他鞭毛虫混入病料造成误诊。采集用的器皿和冲洗液等应加热使接近体温，否则虫体骤然遇冷会失去活动力或死亡。冲洗液应采用以玻璃装置制备的蒸馏水配制的生理盐水，以保证冲洗液中不含金属离子，减少金属离子对虫体的影响，病料采集后应尽快地进行检查。

由母畜采集病料，是直接取阴道分泌的透明黏液。建议用一根长45cm，直径1.0cm的玻璃管，在距一端的12cm处，弯成150℃角，消毒后备用。使用时将管的“短臂”插入受检畜的阴道，另一端接一橡皮管并抽吸，少量阴道黏液即可吸入管内。取出玻管，两端塞以棉球，带回实验室检查。

收集公牛包皮冲洗液时，应先准备100～150ml加温到30℃～35℃的生理盐水，用针筒将生理盐水注入包皮腔。用手指将包皮口捏紧，用另一只手按摸包皮后部，而后放松手指，将液体收集于广口瓶中待查。

流产胎儿，可取其第四胃内容物、胸水或腹水检查。

（二）检查方法

1.压片检查法　将收集到的病料，立即放于载玻片上，并防止材料干燥。对浓稠的阴道黏液，检查前最好以生理盐水稀释2～3倍，羊水或包皮洗涤物最好先以2000r／min离心5min，而后以沉淀物制片检查。未染色的标本主要检查活动的虫体，在显微镜下可见其长度略大于一般的白细胞，能清楚地见到波动膜，有时尚可见到鞭毛，在虫体内部可见含有一个圆形或椭圆形的有强折光性的核。波动膜的发现，常作为本虫与其他一些非致病性鞭毛虫和纤毛虫在形态上相区别的依据。

2.涂片染色检查法　以上收集到的标本，也可以固定、染色制成永久性标本，制片办法很多，常用的检查方法有两种。

（1）苏木素染色法

①固定液和染色液

邵氏固定液（Schaudinn’s fixative）：

氯化高汞（Mercuric Chloride）饱和水溶液　 2份

95%酒精　　　　　　　　　　　　　　　　　1份

使用前在每100ml氯化高汞—酒精混合液中加冰醋酸5～10ml。

苏木素染液：将苏木素1.0g溶于10ml纯酒精内，再加蒸馏水200ml，放置21～28d。

碘酒：加碘到70%酒精中使呈深琥珀色。

②染色法：将涂片浸入40℃的邵氏固定液中3min，再将涂片移入70%酒精中浸泡2min；再移入碘酒精中浸泡10min；移入70%酒精中浸泡1～2h；移入50%酒精中浸泡5min；流水中洗10min；在40℃的20%硫酸铵铁水溶液中浸2min；流水中洗3min。，40℃的苏木素染液中染1min；流水中洗2min；冷的2%硫酸铵铁水溶液中脱色5～10min；流水中洗10～30min；逐级通过50%、70%、80%、90%、100%的酒精，纯酒精与二甲苯的等量混合液和二甲苯的等量混合液和二甲苯，每种液体中各2min；最后滴加一滴加拿大胶，盖上盖玻片封固即成。

（2）姬氏染色法：此法简便，步骤如下：取含虫的阴道分泌物制成抹片；不待干，立即用20%福尔马林蒸气固定，约需1h（即用培养皿，皿内放些加有20%福尔马林的棉花，用两根玻棒架于棉花上，将涂片抹面向下，置玻棒上）；取下玻片，待干后，甲醇固定2min；用姬氏染色法染色；水洗、晾干、检查。

二、马媾疫锥虫检查法

马媾疫锥虫在末梢血液中很少出现，而且数量也很少，因此血液学检查在马媾疫诊断上的用处不大。检查材料主要应采取浮肿部皮肤或丘疹的抽出液，尿道及阴道的黏膜刮取物，特别在黏膜刮取物中最易发现虫体。

1.病料采集　采取病料时，浮肿液和皮肤丘疹液用消毒的注射器抽取，为了防止吸入血液发生凝固，于注射器内先吸入适量的2%柠檬酸钠生理盐水。马阴道黏膜刮取物的采取，先用阴道扩张器扩张阴道，再用长柄锐匙在其黏膜有炎症的部位刮取，刮时应稍用力，使刮取物微带血液，则其中容易检到锥虫。采取公马尿道刮取物时，应先将马保定，左手伸入包皮内以食指插入龟头窝中，徐徐用力以牵出阴茎。此时可用消毒的长柄锐匙插入尿道内，刮取病料。也可用灭菌纱布，以生理盐水浸湿，用敷料钳夹持，插入公马尿道或母马阴道，擦洗后，取出纱布，洗入无菌生理盐水中，将盐水离心沉淀，取沉淀物检查。

2.检查方法　将采集的病料，加适量的生理盐水，置载玻片上，覆以盖玻片，制成压滴标本检查；也可以制成抹片，用姬氏液染色后检查。