薄层色谱检查

第一节　薄层色谱检查

一、概念

系将供试品溶液点样于薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用于药品的鉴别或杂质的检查。

二、技术依据及原理

薄层色谱鉴别法系将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板上，呈一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法在同板上所得的色谱图作对比，用于进行兽药的鉴别的方法。

三、仪器与材料

1.玻板

除另有规定外，用5cm×20cm、10cm×20cm或20cm×20cm规格，要求光滑、平整，洗净后不沾附水珠，晾干。

2.固定相或载体

最常用的有硅胶G、硅胶GF₂₅₄、硅胶H、硅胶HF₂₅₄，另外还有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F₂₅₄等。其颗粒大小，一般要求直径为10～40μm。薄层涂布，一般可分无黏合剂和含黏合剂两种，前者系将固定相直接涂布于玻板上，后者系在固定相中加入一定量的黏合剂，一般常用10％～15％煅石膏（CaSO₄·2H₂O140℃加热4h），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5％～0.7％）适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。

3.点样器

微量进样器。还可以选用点样设备，如半自动或自动点样器。

4.展开室

应使用适合薄层板大小的专用玻璃缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。

四、操作方法

1.薄层板制备

除另有规定外，将1份固定相（如硅胶）和3份水在研钵中向同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒在玻板上，倾斜玻板并使其充满整块玻板，轻轻振动使涂布均匀（厚度为0.2～0.5mm），将涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，可通过透射光和反射光检视，表面应均匀、平整、无麻点、无气泡、无破损，在110℃烘30min，冷却后即置有干燥剂的干燥箱中备用。可用羧甲基纤维素钠溶液（0.2％～0.7％）代替水。取羧甲基纤维素钠适量，加水100ml，加热煮沸，直至完全溶解，放置一定时间，取上清液使用。也可选用商品预制板。

2.点样

除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～2.0cm，样点直径为2～4mm，点间距离为1.5～2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

可用在薄层板的两边各刮去约5mm吸附剂的方法，防止边缘效应。

3.展开

展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁上贴2条高、宽与缸一样的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。

将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入的展开剂的深度为距薄层底0.05～0.1cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封缸盖，待展开至规定距离（一般为10～15cm），取出薄层板，晾干，检视。

4.显色

按规定显色方法操作。

喷洒显色剂后，如需加热显色应注意控制加热温度和时间。

5.色谱的检视

按规定方法进行检视，将供试品色谱与标准品、对照品或对照药材色谱进行比较。

五、记录

试验日期。

供试品及标准品，对照品或对照药材的名称、来源及批号，供试品溶液及标准品溶液，对照品溶液及对照药材溶液的制备方法和浓度。

薄层板吸附剂类型。

点样量（μl）。

展开剂系统。

展开时的室温和相对湿度。

显色方法。

检视结果。应说明供试品色谱中的主斑点与标准品、对照品或对照药材色谱是否一致。

绘制薄层色谱图。

六、结果判定

根据检视结果判定是否符合标准规定。