γ-干扰素试验

第三节　γ-干扰素试验

γ-干扰素试验的原理基于血液T淋巴细胞对牛结核菌素PPD的细胞免疫反应。结核菌素PPD抗原递呈到全血组织培养物中的淋巴细胞后，感染牛结核杆菌的细胞就能产生IFN-γ，未感染牛结核杆菌的淋巴细胞不会产生IFN-γ，因此，γ-干扰素的检测与牛结核杆菌感染密切相关。通过基于单克隆抗体的夹心ELISA检测γ-干扰素。

Brcyce M.Buddle等用ESAT-6作抗原进行γ-干扰素试验，并将其与PPD皮内变态反应进行比较，发现用ESTA-6作抗原比PPD变态反应特异性高，敏感性低，但可减少假阳性，还可对PPD变态反应阴性牛进行检测。据报道，结核菌素试验后的8～28天进行γ-干扰素试验，对其灵敏度和特异性没有显著影响。但是成本也高，并且收集血样后试验必须在8小时内进行。所以，这种方法不适合于临床牛结核病的检测。我国在此方面还没有应用。有报道称：用澳大利亚、美国、爱尔兰、新西兰、意大利和西班牙的13000头牛进行田间试验，结果表明，BOVIGAMTM在诊断牛结核病时更敏感，甚至能检出早期感染牛。

在美国国家动物疾病中心的家畜细菌病研究中心（美国爱荷华州Ames），用20头对灭活牛结核分枝杆菌敏感的Hereford食用牛进行了实验室对照研究。比较了BOVIGAMTM对美国PPD和辉瑞澳大利亚PPD的反应，表明，不管用美国的PPD还是用澳大利亚的PPD刺激，所有牛都表现为阳性。另外，新西兰的研究表明，试剂盒的特异性不受皮肤试验的影响，在尾根皱襞试验（CFT）后3～30天使用时，比颈部皮肤试验（CCT）更加敏感。

此外，还有菌体成分检测法，利用薄层层析技术（thin-layerchromatography，TLC），通过分析牛分枝杆菌的脂质成分PGL（phenolic glycolipid）与PDIM（phthiocerol dimycocerosate），可以快速检测和鉴定牛分枝杆菌，仅需10～15mg的细菌培养物即可，具有简便、快速的优点，可以成为传统生化鉴定的替代方法。

当然，牛结核病的诊断方法有很多，无论哪种检测方法都有其优点和缺点，如与细胞免疫相应的淋巴细胞增生试验和γ-干扰素试验，或者因为操作繁琐；或者因为成本高，所用试剂含有放射性物质，难以在牛结核病的常规检测中运用；或者因为分子生物学检测技术需要贵重的仪器设备，技术复杂，对实验室和操作人员的要求较高等原因，使其在常规牛结核病普查中难以运用。目前，作为法定检疫方法，结核菌素试验仍然是普查检疫中运用的方法，但它有许多不足之处。所以，牛结核病普查中比较好的做法是：检测细胞免疫的结核菌素试验和检测血清抗体的间接ELISA同时运用，互相弥补不足之处，尽可能地提高检测的敏感性和特异性。在净化牛场时，ELISA检测为阳性的病牛，不管结核菌素试验是否为阳性，都应该进行扑杀处理；结核菌素试验阳性而ELISA检测阴性的牛，应该重复进行结核菌素试验，再结合其他的检测方法，排除非特异性因素的干扰，以降低经济损失。