无病毒苗木的繁育

五、无病毒苗木的繁育

苹果是多年生作物，在遗传上是高度杂合体，并且一般需要异花授粉才能结实，所以采用种子繁育后代会产生变异，导致经济性状下降。因此，为了保持品种特性，需要进行嫁接繁殖。一株苹果苗有两部分组成，上部为嫁接的品种，下部为砧木。苹果树在长期的繁殖和生长发育过程中，会感染病毒而产生病毒病害，病毒病害对苹果树的生长发育和果实的产量和质量有不良的影响。病毒是一类特殊的微生物，由核酸和蛋白质外壳组成，病毒侵入寄主细胞后，利用寄主细胞的基础物质合成新的病毒粒子，从而使寄主发病。苹果病毒有30余种，目前我国鉴定明确的有6种：苹果锈果病毒、苹果花叶病毒、苹果绿缩果病毒是非潜隐性病毒，发病后外观有明显的症状；苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒、苹果茎沟病毒是潜隐性病毒，外观无明显症状。所以，建立无病毒苗木繁育体系、健全无病毒检疫检验制度、培育无病毒原种、防止果苗带毒和人为传播是防止和克服果树病毒病危害的根本措施。

1.建立无病毒果苗繁育体系

无病毒果苗有两个来源，一是国内外引进无病毒繁殖材料（砧木或接穗），经过检测确认不带病毒后，可作为无病毒原种妥善保存和繁殖利用；二是生产中选择优良品种母株，进行脱毒处理和严格病毒检测后，将确认不带病毒的单系作为无病毒原种，供繁殖和利用。

无病毒苗木繁育体系主要包括：无病毒原种培育、引进、保存和病毒检测；无病毒品种采穗圃；无病毒砧木种子园；无病毒无性系砧木母本园和无病毒苗木繁殖圃等部分。

2.无病毒果苗的培育

（1）热处理脱毒。可延缓病毒扩散速度并抑制病毒增殖，使果树生长速度超过病毒的扩散速度，达到正在生长的果树组织不含病毒的目的。之后，再将不含病毒组织取下，培养成无病毒个体。主要过程如下：

①将拟行热处理的砧木或品种枝条嫁接于盆栽砧木上，培育成供试盆栽苗木。

②于2～3月，将解除休眠的供试盆栽苗移入15℃～28℃的温室，促其萌发生长。待新梢长至5厘米时移入热处理箱中，温度控制在37±1℃，相对湿度保持60%～80%，处理时间4周以上。可脱去多种潜隐性病毒。热处理时间愈长，脱毒效果愈高，但脱毒材料受热死亡也愈多。在这一温度条件下，苹果新梢的生长不会受到严重影响，而病毒却被钝化，苹果新梢的生长速度比病毒向顶端扩展的速度快，在新梢的顶端就会出现无病毒的区域。

③切取热处理期间长出的新梢顶端10～20毫米作接穗，在准备好的盆栽实生砧木上实行嫩梢嫁接。

④经过热处理的嫩梢嫁接成活后，长至50～60厘米高时，采取脱毒苗新叶，进行检测，淘汰带毒苗。未测出病毒的脱毒苗，取其芽片嫁接于指示植物上，进行复测。

⑤确认无病毒以后，可作为无病毒母本树，繁殖无病毒苗木。

（2）茎尖组培脱毒。果树茎尖生长点大多不带病毒或病毒浓度很低，无病毒部分一般为茎尖的0.1～0.2毫米，通常多切取带有两个叶原基进行组织培养。

（3）热处理与组织培养相结合脱毒。常用两种方法，一是切取经过热处理后长出的新梢0.5～0.8毫米的茎尖，进行组织培养。二是先将微茎尖组织培养分化成丛状苗，将其继代苗放入37±1℃恒温光照培养箱中热处理，再切取0.3～0.5毫米茎尖组织培养并准备病毒检测。

（4）茎尖嫁接脱毒。用微小的茎尖作接穗，嫁接于组培无毒苗幼嫩砧木上，培养成无病毒苗木并扩大繁殖。