一、目的要求
掌握细菌抹片的制备方法和常用的染色法以及油镜的使用。
二、仪器及材料
大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的纯培养物、载玻片、接种环、酒精灯、洗瓶、废液缸、吸水纸、生理盐水、革兰染色液、瑞氏染色液、姬姆萨染色液、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。
三、方法与步骤
（一）细菌抹片的制备
1.玻片的准备：载玻片应清晰透明，洁净无油渍，滴水后能均匀展开。如有油渍可滴95％酒精2～3滴，用洁净纱布擦拭，然后在酒精灯外焰上拖过几次；若仍有油渍可用1～2滴冰醋酸再擦，再在酒精灯外焰上拖过几次。
2.抹片：不同材料的制片方法如下：
（1）液体材料：液体培养物可直接用无菌接种环取一环材料，于玻片的中央均匀涂布成适当大小（直径cm左右）的薄层；血液等可用边缘整齐的载玻片的一端蘸取少许，在另一张洁净的玻片上以45°角均匀推成一薄层。
（2）非液体材料：应用无菌接种环取少量生理盐水或蒸馏水置于玻片中央，然后无菌接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂布成适当大小（直径cm左右）的薄层。
（3）组织脏器：用镊子夹持，用无菌剪刀剪下一块，用其新鲜切面在玻片上压印或涂抹成一薄层。
3.干燥：自然干燥。
4.固定：通常用火焰固定，即将干燥好的抹片，使涂抹面向上，以其背面在酒精灯火焰上来回通过数次，略作加热（但不能太热，以不烫手背为度）进行固定。血液、组织脏器等抹片作姬姆萨染色时，不用火焰固定，而应用甲醇固定3～min。
通过固定，可除去抹片的水分，涂抹材料能很好地贴附在玻片上，以免水洗时易被冲掉；使抹片易于着色或更好地着色，因为死的蛋白质比活的蛋白质着色力强；可能杀死抹片中的微生物。
（二）革兰染色
1.在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1～min，水洗。
2.加革兰碘溶液于抹片上媒染，作用1～min，水洗。
3.加95％酒精于抹片上脱色，约s～min，水洗。
4.加稀释石炭酸复红（或沙黄水溶液）复染10～s，水洗。
5.吸干或自然干燥，油镜镜检。革兰阳性菌呈蓝紫色，革兰阴性菌呈红色。
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