【摘要】：大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的平板及肉汤培养物、各种药敏纸片、眼科镊子、普通营养琼脂平板、接种环、酒精灯、温箱等。平板在室温下静置3～min，用无菌镊子将含药物纸片紧贴于琼脂表面，并轻压，使纸片与培养基紧密接触。按抑菌圈直径的大小报告高敏、中敏、耐药。具体标准可参考CLSI制定的《抗微生物药物敏感性执行标准》。制备好的药敏纸片分装无菌小瓶，密封，放干燥低温处保存。
实训五 细菌的药敏实验
一、目的要求
掌握标准纸片扩散法（K-B法）的操作方法、结果的判读与解释及其临床意义。
二、仪器及材料
大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的平板及肉汤培养物、各种药敏纸片、眼科镊子、普通营养琼脂平板、接种环、酒精灯、温箱等。
三、方法与步骤
（一）接种细菌
取一菌种，在普通营养琼脂平板上连续均匀致密地划线。或者用无菌棉拭蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后在平板表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60°，最后沿平板内缘涂抹1周。
（二）贴药敏纸片
平板在室温下静置3～min，用无菌镊子将含药物纸片紧贴于琼脂表面，并轻压，使纸片与培养基紧密接触。各纸片中心相距应大于mm，纸片距平板内缘应大于mm（直径cm的平皿最多贴7张纸片，图7）。置37℃孵育16～h，观察结果。
（三）判定结果
观察药敏纸片周围有无抑菌圈，量取其直径，用毫米记录（图8）。按抑菌圈直径的大小报告高敏、中敏、耐药。具体标准可参考CLSI制定的《抗微生物药物敏感性执行标准》。
图7 药敏纸片的贴法
图8 药敏试验产生的抑菌圈
四、知识链接
药敏纸片的制备。
1.选用优质定性滤纸（如新华1号），用打孔器打成直径为mm的小圆片，100片为一组放入小瓶，121℃高压灭菌，60℃～100℃烘干备用。
2.于每小瓶加入一定浓度的药液mL，使纸片均匀地浸吸药液，置4℃冰箱浸泡30～min，放37℃～50℃的温箱，烘干2～h。制备好的药敏纸片分装无菌小瓶，密封，放干燥低温处保存。
注：各种药敏纸片均有市售。
表2 肠杆菌科药物敏感性判断标准
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