病毒的鸡胚接种

实训六　病毒的鸡胚接种

一、目的要求

掌握鸡胚接种技术及收毒方法。

二、仪器及材料

9～11日龄的白壳鸡胚、新城疫Ⅳ系苗、无菌生理盐水、无菌注射器（mL、mL）、三棱针、75％酒精棉、碘酒棉、镊子、石蜡、照蛋器等。

三、方法与步骤

以绒毛尿囊腔接种新城疫病毒（NDV）为例。

（一）病料的处理

接种材料若是病料，按如下方法处理：取1.0～2.g疑似含NDV的鸡内脏组织病料，匀浆研磨后用无菌生理盐水制成1∶10悬液，每毫升加入青霉素和链霉素各000～U，置4℃冰箱处理4～h，以抑制可能污染的细菌，然后经r/min离心min，取上清液作为接种材料。

接种材料是新城疫Ⅳ系苗则用无菌生理盐水稀释成一定浓度。

（二）病毒接种

1.照蛋：取9～11日龄的鸡胚，在照蛋灯下用铅笔画出气室范围，在气室上方和下方避开大血管和胚体的位置，分别作一记号。

2.消毒：在记号位置用碘酒棉消毒后，酒精棉脱碘。

3.打孔：用消毒的三棱针先后在气室和气室下方标记的位置各打一孔。

4.注射：用mL无菌注射器吸取病毒液，针头从小孔处插入，深1.cm，即已穿过了外壳膜且距胚胎有半指距离（图9），注射量为0.1～0.mL。

5.封孔：用融化的石蜡先封闭注射孔后封闭气室孔。

6.孵育：置37℃温箱中大头朝上直立孵育4～d。

接种后h内死亡的鸡胚，系由于接种导致鸡胚受损或其他原因而死亡，应弃去；h后，每天照蛋2次，如发现鸡胚死亡立即放入冰箱，于一定时间内不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死。死亡的鸡胚置冰箱中1～h即可取出收取材料并检查鸡胚病变。

图9　尿囊腔接种位置

（三）接种材料的收获

原则上接种什么部位，收获什么部位。绒毛尿囊腔内接种者用无菌手术去气室顶壳，开口直径为整个气室区大小，以无菌镊子撕去一部分蛋膜，撕破绒毛尿囊膜而不破羊膜，用镊子轻轻按住胚胎，用无菌吸管或无菌注射器（去掉针头）吸取尿囊液置于无菌容器中，多时每只胚可收mL，将收获的材料低温保存。

收获时注意将吸管置于胚胎对面，管尖放在镊子两头之间。若管尖不放镊子两头之间，游离的膜便会挡住管尖吸不出液体。收集的液体应清亮，混浊则表示有细菌污染。最后取2滴尿囊液滴于斜面培养基上，于温箱中培养作无菌检查。无菌检查不合格者，收集材料需废弃。