人类细胞氏小体的观察

实验五　人类细胞Barr氏小体的观察

一、实验目的

（1）通过实验初步掌握观察与鉴别人类细胞中Barr氏小体的简易方法。

（2）掌握识别Barr氏小体的形成特征及所在部位。

（3）鉴定个体的性别，为进一步研究人体染色体畸变与疾病的关系提供基础方法，为遗传病临床诊断提供参考。

二、实验原理

1949年Barr等发现，在雌猫的神经细胞核内有一个凝缩的深染小体，而雄性细胞中则没有。后来了解，在雌体细胞中的两条X染色体在间期时有一条（或这条的大部分）处于凝集而不活动状态，从而形成了这种X染色质（或称性染色质巴氏（Barr）小体）。进一步研究发现，所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体；在个别的雌或雄体中，有多于两条X染色体时，在间期细胞内除一条外，其余都形成X染色质体（Barr氏小体）。

人类正常的男、女体细胞中，分别有XY和XX性染色体，女性的两条X染色体中，在间期时也有一条不表现活性而保持凝缩状态，因此易于用适当的染料加以显示，成为便于观察的性染色质体。

三、实验材料

人的口腔颊部黏膜细胞，毛发。

四、实验用具和试剂

1．仪器用具

显微镜，乙醇灯，载玻片，盖玻片，牙签，吸水纸。

2．药品试剂

95％乙醇，5％醋酸，1％乳酸醋酸地衣红或醋酸洋红染液。

3．试剂制备

1％乳酸醋酸地衣红制备方法：

（1）先制取2％醋酸地衣红：取45mL冰醋酸置于250mL的三角瓶中，瓶口加一棉塞，在乙醇灯上加热至微沸，缓慢加入2g地衣红使其溶解，待冷却后加入55mL蒸馏水，振荡5～10min，过滤到棕色试剂瓶中备用。或在三角瓶中加入100mL45％的冰醋酸，在乙醇灯上加热至沸，慢慢溶入2g地衣红，继续回流煮沸1h后过滤备用（此溶液为2％醋酸地衣红）。

（2）1％乳酸醋酸地衣红：临用前，取等量的2％醋酸地衣红与70％乳酸液混合，过滤后使用。

五、实验步骤

1．口腔颊部黏膜细胞的观察

让受检者用水漱口数次，尽可能除去细菌及杂物，然后用清洁灭菌的牙签或适当的刮片，从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜细胞。在原位刮取2～3次，第一次的刮取物弃去，将第二次、第三次的刮取物分别涂抹在干净载玻片上。涂抹范围为1～2张盖片大小，待稍干后，滴加1～2滴醋酸洋红或乳酸醋酸地衣红染液，在室温下染色20～30min，染色过程中注意不要让染液干燥，然后加盖玻片复以吸水纸，用手轻度加压后进行镜检。

2．根部细胞的观察

拔取一根带有毛根的头发，自基部截取2cm左右置载玻片上，在毛根部加一滴地衣红染液，片刻后再加一滴50％的醋酸（或只加50％的醋酸），低倍镜下观察，待毛根鞘软化后拔去毛干，重新加一滴染液，覆以盖玻片，在乙醇灯下轻微加热后，静置6min，盖一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。

3．Barr氏小体的辨认

低倍镜下观察典型的可数细胞，其标准是：核质呈网状或细颗粒状分布。核膜清晰，核无缺损，染色适度，周围无杂菌。选定后的细胞，在高倍镜或油镜下进一步观察。

Barr氏小体的形态表现为一结构致密的染色小体，轮廓清楚，直径1μm左右，常附着于核膜边缘或靠近内侧，其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形（图5．1）。正常女性口腔黏膜细胞中Barr氏小体为30％～50％（图5．2），在不同实验中计数的差别较大，而在男性中偶尔可见不典型者。

图5．1　Barr氏小体形状

图5．2　人口腔Barr氏小体

六、作业及思考题

（1）观察女性50个可数细胞，同时观察男性50个可数细胞作为对照，分别计算出含Barr氏小体细胞的百分比。

（2）观察并选绘4～5个典型细胞，并标注出Barr氏小体的形态部位。

（3）按照“补偿”理论解释XO性染色体异常与XX性染色体正常个体之间的表型差异。