真鲷精子诱导漠斑牙鲆减数雌核发育研究

真鲷精子诱导漠斑牙鲆减数雌核发育研究

真鲷精子诱导漠斑牙鲆减数雌核发育研究⁽¹⁾

柳学周1　宁　鑫1，2　徐永江1　赵　明1　李春广1，2　李　军3

（1．中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室，山东青岛266071；

2．上海海洋大学水产与生命学院，上海201300；

3．中国科学院海洋研究所，山东青岛266071）

摘　要　采用紫外线（UV）灭活的冷冻真鲷（Pagrosomus major）精子激发漠斑牙鲆（Paralich－thys lethostigma）卵子发育。冷冻真鲷精子适宜的UV灭活剂量为72mJ／cm²，随着处理时间延长，胚胎的孵化率呈现哈特维希效应，其中40s灭活组胚胎孵化率达到最高29±1．9%，单倍体率100%。利用冷休克法抑制卵子第二极体排出，成功获得雌核发育二倍体仔鱼。冷休克处理温度为0～2℃，处理起始时间3min、持续时间45min时，雌核发育二倍体胚胎的孵化率最高，达9．4±0．71%，获得批量雌核发育仔鱼。雌核发育仔鱼经流式细胞仪和染色体倍性鉴定，均为二倍体（2n＝48），未发现单倍体和非整倍体现象。雌核发育二倍体组和单倍体组与正常二倍体组组孵化时间差异显著，分别历时64h59min和55h49min。雌核发育二倍体仔鱼与正常二倍体仔鱼形态特征差异不显著（P＞0．05），单倍体仔鱼明显畸形。本研究表明，采用适宜的紫外线剂量灭活的冷冻真鲷精子可成功诱导漠斑牙鲆雌核发育，获得雌核发育二倍体后代，试验结果为漠斑牙鲆全雌化苗种生产提供了技术和理论依据。

关键词　漠斑牙鲆　异源精子　雌核发育　冷休克　胚胎发育

漠斑牙鲆（Paralichthys lethostigma），属鲽形目（Pleyronectiformes），鲆科（Bothidae），牙鲆属（Paralichthys），具有品质优、适应性广、抗逆性强等特点，是一种具有较高商业价值的优良养殖鱼种。漠斑牙鲆雌雄个体生长差异较大，如2龄雌、雄鱼体长分别为320mm和230mm［1］，通过性别控制方法生产单性苗种进行养殖，可获得更快的生长速度和更高的经济效益。

目前，鱼类获得单性后代的技术包括孤雌生殖、雌核发育、雄核发育和杂交育种等。利用雌核发育技术已成功在鲑科、鲤科、鳅科、鲷科和鲽科等多种经济鱼类中获得单性后代群体［2－3］，在鲆鲽类中，开展的研究主要集中在条斑星鲽（Verasper moseri）^［4］、褐牙鲆（Parali－chthys olivaceus）^［5－6］、庸鲽（Hippoglossus hippoglossus）^［7］、大菱鲆（Scophthalmus maxi－mus）^［8－9］、半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Günther）^［10］、漠斑牙鲆［13］等。国外漠斑牙鲆雌核发育研究已有相关报道，利用漠斑牙鲆、鲻（Mugil cephalus）和美洲黑石斑（Centropristis striata）^{［11－12］}精子成功获得雌核发育后代；国内杨景峰等［13］利用冷冻花鲈精液（Lateolabrax japonicas），采用静水压法诱导漠斑牙鲆雌核发育成功。有关漠斑牙鲆雌核胚胎发育时序观察国内外均无相关报道。本研究利用灭活的冷冻真鲷精子，采用冷休克法抑制第二极体排出，成功获得雌核发育二倍体仔鱼，并对其单倍体、雌核发育二倍体的胚胎发育时序和仔鱼形态进行了观察，旨在为漠斑牙鲆雌核发育提供新的途径和数据，同时也为比目鱼类的雌性制种技术提供技术参考。