实训项目四 食用菌原种、栽培种制作
Ⅰ 原种的制作
一、目的要求
了解食用菌原种、栽培种的制作原理，掌握其制作程序及关键技术。在无菌条件下，采用无菌操作技术，将母种接到原种培养料上，经过适宜条件的培养，菌丝便可长满原种培养料瓶（袋），即成为原种。原种主要用于繁殖栽培种，本次实验主要学习原种的制作技术。
二、实训器材
生长旺盛的母种、原种培养料、菌种瓶、盐水瓶、麦粒、酒精灯、接种钩、75%酒精棉球、接种箱、培养箱、培养室。
三、实训内容
1.培养基配方
（1）棉子壳或杂木屑78%、米糠或麸皮20%、白糖1%、石膏粉1%，含水量60%～65%，pH自然。
（2）麦粒5kg、糖100g、碳酸钙50～100g。
2.配料、装袋（瓶）和灭菌
（1）配方（1）适合多种食用菌，料水比例大约在1∶（1.1～1.2）。根据生产量的大小按上述配方比例称取原料，除糖溶于水外，其他原料先置于搅拌机或用手工拌和均匀，再将水拌入，料水充分搓和均匀。含水量控制在60%～65%，常用的检查方法是用手握料，指缝间有水渗出为限。料拌均匀后，即可分装。一般原种用75mL的菌种瓶，边装边压实，菌种瓶装好后上边压平实，并用捣木一端的尖头打一孔，随即用清水将瓶口内外及瓶身处洗干净，封口（一层塑料布二层报纸扎口或直接用棉花塞口）。封口后立即装锅灭菌，121℃灭菌1.5h，备用。
（2）配方（2）适于平菇、金针菇。将麦子洗净后直接放入锅内加热煮沸约10min，再加入1%的糖，继续煮到麦子熟而不烂，透明发亮，倒入筛中滤去水分后，摊在布上或牛皮纸上晾去表面水分，再放入盆中加1%的CaCO3拌和均匀后即可装瓶，用500mL的生理盐水瓶装至400mL的刻度线即可。瓶装好后，封口灭菌同上。
3.接菌
将灭过菌的菌种瓶、母种和接种钩等一起放入接种箱消毒后，开始接种。母种接原种，一般一支斜面菌种可接原种4～6瓶。接种时严格遵守无菌操作规程。双手要用75%酒精棉球消毒，拔开母种棉塞，管口用酒精火焰封口。接种钩要经过火焰灭菌。然后将母种（菌丝）连同培养基用接种钩分成4～6段，每一段母种迅速转移到原种培养基的穴内，稍压实，使母种与原种培养料相接触即可。
4.培养
接完种后，将待培养的菌种瓶移入培养箱或光线暗淡的培养室，平卧或竖立在瓶架上发菌，根据各种菌类的生长要求，调至适宜的温度。培养初期逐日观察菌丝定植生长和杂菌污染情况。如果接种5天后仍未见菌丝萌发，则应及时补接母种，如发现杂菌应及时清除。同时要经常调整瓶的位置，以利于菌丝生长一致，当菌丝长满瓶后及时使用。若暂时不用可在低温、干燥、避光的环境条件下短期保存，一般棉子皮原种需25天左右长满瓶，麦粒原种15天左右。
四、思考题
（1）什么叫原种？原种有何作用？
（2）如何区别原种和栽培种？
（3）简述制备原种时应该注意哪些事项？
Ⅱ 栽培种的制作
一、目的要求
熟练掌握栽培种的制作原理和方法。将原种转接到栽培种培养料上，经适宜条件培养长满瓶（袋）后即成为栽培种。栽培种主要用于大面积生产。
二、实训器材
精选出生长良好的原种、栽培种培养料（棉子壳、木屑等）、酒精灯、长柄镊子、接种钩、75%酒精棉球、接种箱、培养箱、制种袋子、菌种瓶、捣木等。
三、实训内容
1.培养基的制作
常用木屑麸皮培养基和棉子壳培养基（棉子壳98%、石膏粉2%），配制过程与原种培养基的制备类似。
2.装箱、接种
（1）装箱。将灭过菌的栽培料袋（瓶）、接种用的器具放入接种箱中。将待接的栽培种培养袋（瓶）置于接种箱一端，袋横卧码好，瓶立码。然后进行空间消毒。
（2）接种。原种瓶口应用75%酒精棉球擦拭，进行瓶口消毒。然后用火焰灭过菌的接种钩清理原种表皮的菌被，再将长满菌丝的培养料挖成粒（块）状。在酒精灯火焰旁，解开袋绳结，用接种钩将原种粒（块）移植到栽培种培养料瓶袋内。一般每瓶原种可接25～35袋（两头接），栽培50～70瓶栽培种。如果使用麦粒原种，每瓶麦粒原种可接35～50袋（两头接栽培种）。
3.培养
接完种后，将待培养的菌种袋（或瓶）置于培养室发菌，在培养过程中定期向地面喷洒化学消毒药品，防止空气污染。接种后3～10天，经常观察菌丝生长情况，菌种瓶30天左右即可长满。菌丝长满一周后，即可栽培。
四、思考题
制备栽培种时应注意哪些事项？
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