怎样配制母种培养基

5．怎样配制母种培养基？

（1）常用母种培养基：

配方一：马铃薯葡萄糖培养基。马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、水1　000毫升。

配方二：马铃薯、蔗糖培养基。马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂20克、水1　000毫升。

配方三：马铃薯综合培养基。马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1．5克、维生素B　110毫克、水1　000毫升。

（2）培养基的制作方法：先将马铃薯洗净去皮，称取200克，切成薄片，加水1　100～1　200毫升，煮沸15分钟左右。当煮至马铃薯酥而不烂时，用4层纱布过滤，加入事先用水泡软的琼脂，继续加热煮沸，直到琼脂完全溶化。然后再倒入1　000毫升的烧杯中，再根据配方分别加入其他材料，加热搅拌，使之完全溶化。滤液不足1　000毫升时，用开水补足，趁热用漏斗分装于试管中，每支试管的装量为试管高度的1／5，切勿使培养基沾到试管上部的内壁。待培养基冷却凝固后，塞上棉塞，每7支试管扎成一捆，上部棉塞部分，用聚丙烯塑料膜包起，外面再罩一层牛皮纸包扎好，以免灭菌时水蒸汽浸湿棉塞。

（3）灭菌：对于装在试管中的体积较小，一般用手提式高压锅灭菌即可，也可用家庭用压力锅灭菌。灭菌压力为每平方厘米1～1．4千克（家用压力锅注意看说明书上的压力），灭菌30分钟（注意开锅后，排尽冷气再加压，压力达到要求后开始计时）。然后停火，自然降压至零，再放气、开盖，趁热取出试管束，放在桌面上摆成斜面，斜面长度应占试管长度的3／5为好。待冷却凝固后，即可接种。

（3）接种：接种多在接种箱中进行，接种前先对接种箱进行消毒。将斜面试管、接种工具、酒精灯、酒精瓶、酒精棉球等用品放入接种箱内，按每立方米空间甲醛10毫升、高锰酸钾5克的用量，先将高锰酸钾放入瓷碗中，放进接种箱内。瓷碗中再倒入甲醛液，迅速封闭接种箱，进行熏蒸消毒，半小时后再接种。接种时，将双手伸入接种箱，并带进购买来的母种。再用酒精棉球擦拭双手和母种试管外壁，点燃酒精灯，灼烧接种钩，然后放入酒精瓶中备用。用左手拿斜面试管和母种试管，并用右手小拇指和无名指分别夹住两试管的棉塞拔出。再从酒精瓶中取出接种钩，烘干，伸入母种试管内，从中钩出一小块带菌丝的培养基，放入另一支试管的斜面中央，再塞好棉塞，即完成一支试管的接种。将试管放在右侧，以后再取一支斜面试管，继续上述操作，直到将全部试管接种完。接种完的试管仍按原来的样子包扎好。