三、消毒和灭菌
在羊肚菌栽培过程中，我们通常将空气、土壤、水中、入体上、动植物体上以及培养羊肚菌的培养料、设备、工具上的不利于羊肚菌生长发育的微生物统称为杂菌，因此，要获得优质羊肚菌菌种，就要对基质（包括培养基、培养料）的杂菌进行彻底灭菌，即彻底做好消毒灭菌工作是优质菌种的前提。一般采用热力灭菌、拌药消毒等方法。
（一）热力灭菌
根据采用的仪器、温度、时间及压力指标不同又分为高压蒸气灭菌、常压灭菌、常压间歇灭菌、发酵杀菌（巴氏消毒）等方法。
1.高压蒸气灭菌
将灭菌物置于密封的高压锅内，利用加压高温蒸气在较短的时间内达到彻底灭菌的方法。常用的高压锅类型有：手提式，立式，卧式。一般液体培养基在121℃，处理20～30分钟，固体培养基在121 ℃，处理1～2小时。
注：①装锅不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果；②加盖，对角线旋紧螺旋；③压力未降至0时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。
图14 自制灭菌灶
2.常压灭菌
将灭菌物置于灭菌灶内（图14），以自然压力的蒸气进行灭菌的方法。100℃保持8个小时。灭菌灶使用方法：100℃开始计时，维持8～10小时。
注：温度要尽快升至100℃，中途不能停火，经常补充热水。
优点：建灶成本低，容量大；缺点：灭菌时间长、能源消耗量大。
3.常压间歇灭菌
在没有高压灭菌设备的条件下，或对一些不宜用100℃以上温度而又须杀灭其中的细菌芽孢的物质的灭菌，可采用此法。具体做法：将培养基或其他灭菌物置于灭菌锅里，经100℃的热蒸气30～100分钟。
4.发酵杀菌
在羊肚菌生产中经常采用培养料堆制发酵的方法，由微生物的代谢热所产生的高温，使培养料发酵熟的同时，以巴氏消毒的原理，杀死培养料中杂菌的营养体、害虫的幼虫及卵。
（二）拌药消毒
在羊肚菌的生料栽培的过程中，对培养料进行拌料时，通常要加入0.1%多菌灵或甲基托布津等杀菌剂，以杀死杂菌或以制杂菌的生长。
（三）常用消毒剂
化学消毒杀菌剂广泛用于羊肚菌生产过程中的消毒灭菌，其主要种类有：重金属盐类、氧化剂、还原剂、表面活性剂、其他消毒剂等。
1.重金属盐类
如汞、银、铝、锌、铜等。常用0.1%～0.2%升汞溶液对玻璃器皿、非金属器械及用于菌种分离的菌菇、菇木进行表面消毒。
2.氧化剂
如高锰酸钾、过氧化氢、漂白粉等。
3.还原剂
如甲醛，5%的甲醛可杀死细菌芽孢和真菌孢子。
甲醛能与微生物细胞蛋白质的氨基酸结合，引起蛋白质变性。使原生质失去正常活动能力。
4.表面活性剂
如乙醇，70%乙醇的消毒力最强，过高过低消毒效果都差。
常用于接种前手指消毒及不耐热制品的消毒。
5.其他消毒剂
石灰：以4份生石灰加入 份水，即生成熟石灰并放出热量，具有杀菌作用。
硫磺：常用于培养室和出菇房等空间熏蒸杀菌。硫磺粉燃烧后产生二氧化硫，二氧化硫与水作用生成亚硫酸，亚硫酸能夺取菌体细胞中的氧，菌体细胞因脱氧至死。
（四）表面消毒杀菌
表面消毒常用于菌种的分离材料、接种入员的手、器材、工作台面、墙壁等的杀菌处理，表面消毒剂的种类很多，一般是通过涂抹、喷雾、浸泡、洗刷等方法使用。
1.菌种分离材料的表面消毒
子实体未外露的，用0.1%升汞溶液浸泡1分钟；子实体已外露的种菇材料，只能用75%酒精棉球擦菌盖表面和菌柄，不能浸泡在升汞溶液中。
2.手的表面消毒
先用肥皂洗手，再在接种前用75%酒精擦手。
3.接种工具的消毒杀菌
先用75%酒精擦拭刀片、镊子、接种铲等工具，然后用酒精灯外焰灼烧。
4.墙壁、菇床的表面消毒
常用2%～5%的漂白粉洗刷接种室、培养室墙壁、地面、床架、用具等。
（五）室内空间杀菌
接种箱、培养室、出菇房的空间消毒主要采用紫外线杀菌和气体灭菌法，还可辅以空间喷雾的方法，增强杀菌的效果。
1.紫外线杀菌法
一般照射20～30分钟，可杀死空气中95%的细菌。
2.气体灭菌法（熏蒸杀菌法）
常用药物：40%甲醛溶液、硫磺、科达气雾消毒盒、克霉灵气雾消毒剂等。
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