菌种的培养与生产

五、菌种的培养与生产

通过组织分离法、孢子分离法和寄主分离得到的纯菌丝体，即为该种羊肚菌的母种。母种获得以后，为了满足菌种生产的需要，应选出性状优良、纯度高的母种进一步扩大为原种（也叫二级菌种），其制作目的为了扩大种量，满足生产上的需要，检验已制作母种的生命力、纯度；让母种菌丝适应各种秸秆类物质。

（一）接 种

1.母种接种方法

通过组织分离法、孢子分离法和寄主分离得到的纯菌丝体，即为该种羊肚菌的母种（也称一级种），其扩大培养也称继代培养、转接、转管等。将灭菌好的母种培养基试管移入接种箱或洁净工作台，将母种试管用酒精棉擦拭外壁，拿入接种箱，在火焰上打开棉塞，右手拿接种铲或大镊子，并在火焰上烧红待冷，再从母种管内挑出豆粒大小一块菌丝（附带有培养基），打开母种培养基棉塞，将母种菌丝迅速放入原种培养基中央，使菌丝面紧贴瓶内培养基料面，立即塞好棉塞，再依次接下一管。每支母种可转接80～100支母种试管。接种完的试管，及时贴上标签，注明羊肚菌品种、级别、接种日期、接种人等，如图15A所示。

注：一般每支母种试管可扩大繁殖80～100支新管。扩大母种第一次应多些，以避免多次转管，造成菌丝生活力降低，影响产量和质量。一般要求转管不要超过5次。

2.原种接种方法

原种培养基一般采用木屑、棉籽壳、秸秆等。将灭菌的原种培养基罐头瓶或菌种瓶移入接种箱或洁净工作台，将母种试管用酒精棉擦拭外壁，拿入接种箱，在火焰上打开棉塞，右手拿接种铲或大镊子，并在火焰上烧红待冷，再从母种管内挑出豆粒大小一块菌丝（附带有培养基），打开原种培养基瓶薄膜，将母种菌丝迅速放入原种培养基中央，使菌丝面紧贴瓶内培养基料面，立即盖好瓶盖，再依次接下一瓶。每支母种可接20～30瓶原种。接种完的菌种瓶，及时贴上标签，注明羊肚菌品种、级别、接种日期、接种人等。如图15B所示。

图15　接种方法图示（引自徐锦堂1997）

注：培养时应当认真检查菌丝的纯培养程度和菌丝长势，保持纯种培养，制作所用的容器要求使用透明度好的玻璃瓶。室内要遮光或微弱的散射光即可。培养30天左右菌丝长满瓶即可用于扩繁栽培种。如暂时不用，要放在干燥、低温、避光条件下短期贮存。

3.栽培种接种方法

由原种扩大培养而成的栽培种（三级种）是为了加快羊肚菌繁育进度，满足大面积时的菌种需要，常以菌瓶或菌袋作为容器。其接种方法基本上和原种相同，所不同的是：原种用试管母种接种，而栽培种是用培养好的原种接种。首先将原种的菌种瓶在火焰上拔去瓶塞，用消过毒的镊子去掉原种表面的菌膜（一般应弃去瓶口部的1/3），用镊子将洞穴扩大，然后取一块菌种，迅速移入灭过菌的栽培袋内，接种完毕后，迅速将棉塞在火焰上烧灼后塞紧，扎好袋口。一般羊肚菌 瓶原种可扩繁栽培种约100～130瓶。接好种后，根据接种羊肚菌的种类不同，放在适合于此菌丝的生长温度而培养。一般培养菌丝体的温度为22～28℃为宜，灵芝除外。接种完毕后将栽培袋移入恒温箱，在25℃下培养25～30天，菌丝长满后进行栽培袋小量生产。一般香菇、平菇、冬菇、猴头、木耳、银耳的栽培种多用木屑、棉籽壳作培养料，蘑菇多用粪草做培养料。

注：原种在接栽培种时，原种瓶口的一层菌丝体应挖去不用，且栽培种要求料块不脱水干缩。菌丝体健壮有力、颜色纯正，有清香味，无老化现象，无杂菌污染，有的种许可有少量原基，接入栽培料后，发菌快，长势好，生活力强。

（二）培　养

羊肚菌是好气性真菌，菌丝的生长需要新鲜的空气，但不需要光，也就是说要在黑暗中生长，最适生长温度22～26℃，在此温度下生长最快，它在较低温度下生长速度虽慢，但菌丝健壮有力、洁白。因此羊肚菌栽培种培养就需在通风良好、接近黑暗的温度条件下进行。培养室内需保温性好，易通风换气，窗户上挂暗色窗帘遮光，养菌前点燃硫磺熏蒸杀菌，然后再放入菌种培养。培养过程中室温保持在20～25℃、空气相对湿度45%～60%为宜，当菌丝吃料4～5厘米时，应把温度降低到25℃以下，让菌丝健壮生长。如果持续高温高湿即会引起污染，还会使菌丝生长稀疏无力，吐黄水。因此，在培养后期要加强通风换气，保持室内空气新鲜，防止菌丝在高温缺氧条件下生长。同时若出现杂菌，应及时淘汰。

（三）液体菌种的简单制作及培养

液体菌指仿自然界把羊肚菌所需要的糖类、有机和无机含有氮素的化合物、无机盐等一些微量元素等混合在水溶液中，通气供氧进行菌丝大量培养繁殖获得菌种。根据其所用的培养容器及供氧方式，可分为摇瓶振荡培养、浅盘静置培养、发酵罐深层培养和发酵罐密闭气培养等。一般将培养液装入三角瓶中（约占1/5体积）培养。液体培养基可用上述母种培养基（不加琼脂）配制，也可用玉米粉、豆饼粉、糖、无机盐等配制。如：玉米粉1%，葡萄糖3%，酵母粉0.5%，磷酸二氢钾0.1%，碳酸钙0.2%，pH自然，121℃灭菌30分钟。然后接种培养。

注：液体菌种具有生产量大、周期短、菌龄整齐、成本低、接种方便等特点，但若采用种子缸，发酵罐进行深层通气发酵，产生大量菌种，则存在生产中要求设备繁多、技术性强等特点。