淡水养殖动物疾病的其他检查方法

三、淡水养殖动物疾病的其他检查方法

淡水养殖动物的细菌性或病毒性疾病有时具有相同的症状，只依靠肉眼判断的现场诊断方法不能做到正确诊断，如乌鳢内脏表面出现白色或浅黄色结节，它既可能是诺卡氏细菌引起，也可能是舒氏气单胞菌引起，因而如只依靠目检或镜检是无法正确判断，必须在实验室内应用微生物的方法进行分离、培养、鉴定和人工感染等一系列试验。有些细菌性或病毒性疾病，可用免疫和核酸的方法，做出比较快捷的诊断，如荧光抗体、PCR、核酸探针等方法。

1.单克隆抗体技术

单克隆抗体是由一个抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞，再经大量繁殖而来的细胞群所产生的抗体。与常规血清抗体相比，其特异性强，亲和性一致，还具有识别单一抗原决定簇的特性。

2.酶联免疫吸附测定(ELISA)

ELISA的基本原理是:受检物中的抗原或抗体与固相表面的抗体或抗原发生免疫反应并结合在固相表面，此抗原抗体结合物又能结合相应的酶标记物，用洗涤法去除未结合而游离的酶标记物，继而加入酶反应的底物后，底物被酶催化为有色产物，显色的程度与受检物中的抗原或抗体的量直接相关，由此可根据显色的深浅进行定性或定量的测定。

3.免疫荧光抗体技术

荧光抗体技术是最早使用的免疫诊断技术之一。本方法有免疫学反应的特异性和荧光技术的敏感性，可比较快速地监测出少量抗原或抗体在细胞内或组织中的定位分布。

4.核酸杂交技术

核酸探针(DNA探针)诊断技术，是随着基因工程技术的发展而发展起来的第三代诊断技术。该技术利用核苷酸碱基序列互补的原理，以标记的已知核酸片段，通过核酸杂交，来监测和鉴定样品中的未知核酸。核酸探针技术具有快速、简便、敏感度高和特异性强的特点。

5.聚合酶链式反应(PCR)

PCR技术是在引物指导下，依赖于模版和DNA聚合酶的酶促反应，它类似于生物体内的DNA复制，通过反复的变性、复性和延伸，在较短的时间内，可使微量DNA片段的目的基因数量呈几何级数扩增。因此，在掌握了病毒的DNA序列后，可设计特异性较强的引物，以极低的浓度扩增出大量的基因片段，从而达到检测的目的。

6.多重PCR技术

多重PCR技术又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系中加上2对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应。多重PCR的用途主要有两方面:①多种病原微生物的同时检测或鉴定;②病原微生物的变异及分型鉴定、检测。

总而言之，淡水养殖动物病害的正确诊断，来自对宿主、病原和环境条件三方面的综合分析，如果在同一发病的淡水养殖动物身上同时存在几种病原时，就应按其危害性的严重程度，确定其主要病原和次要病原。如车轮虫往往在许多种淡水养殖动物的鳃上和皮肤上，与其他病原生物同时存在，它往往为原发病原，而其致病菌则为继发病原。不过，有时也会发现同时由两种以上的病原菌引起的并发症。在整个调查过程中，应把调查到的材料，结合疾病流行季节、各阶段发病规律进行分析比较，找出其原因，作出诊断，制订合理的预防措施及提出有效的治疗方法。