食用菌母种的制作技术

实训四　食用菌母种的制作技术

学习目标

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知识目标

◎熟悉接种箱的消毒灭菌方法，掌握食用菌母种转管技术。

技能目标

◎能深刻理解无菌操作概念。

◎能熟练操作食用菌母种扩大转管技术。

◎掌握转管的关键技术。

一、材料及用具

（一）消毒灭菌药品及设备

高锰酸钾、37%甲醛溶液、坩埚或烧杯、紫外灯、0.25%新洁尔灭溶液、5%石炭酸溶液、喷雾器等。

（二）转管材料及用具

平菇试管母种、接种箱、接种铲、酒精灯、火柴、95%酒精、75%酒精棉球、肥皂、标签等。

二、实训步骤

（一）接种箱的消毒灭菌药物消毒

首先用0.25%新洁尔灭溶液擦净接种箱内外，再用5%石炭酸溶液进行接种箱内的喷雾。

1.熏蒸杀菌

在坩埚或烧杯里倒放37%甲醛溶液10mL/m³，放进接种箱内，再通过接种箱的侧门在甲醛溶液中加入高锰酸钾5～8g。甲醛溶液与高锰酸钾发生强烈的氧化还原反应，立即沸腾并挥发出有强烈刺激的气体，其中产生的原子氧有较强的杀菌作用。

2.紫外线灯照射

接种箱的顶部安装一根30～40W紫外线灯，在接种箱玻璃外面覆盖一层牛皮纸或几层报纸，黑暗中开灯照射才能增加杀菌效果。紫外线灯照射1小时后关灯，待臭氧散后可开始接种。

（二）食用菌母种转管技术及试管的表面消毒

先用肥皂洗手，再用0.25%新洁尔灭溶液浸泡手两分钟，或以75%酒精棉球擦手和试管表面（包括母种试管和待接种的斜面试管）。在接种箱外的酒精灯的火焰上燃烧试管外的棉塞并立即用手捂灭火焰，再立刻将试管放入接种箱内。

（三）菌种移接（转管）方法

两手从接种孔伸入接种箱内，左手持母种管和斜面管并排于拇指和食指间，拇指在上，食指在下。注意两支试管口对齐于火焰上方。右手持接种铲，用手背指缝拔掉试管棉塞，使棉塞底部朝外。将接种铲先蘸取95%酒精，后在火焰中烧灼接种铲的前段，待冷却后伸入母管内切取一小块带有培养基的菌种块，迅速移入斜面培养基的中部，菌丝朝上。然后，将右手指缝夹住的棉塞底部及周围在火焰上烧一下，立即塞入试管口，旋紧棉塞，再换上第二支斜面试管，重复如上操作。注意，菌种移接的整个过程的动作要求做到“快”“准”，接种铲不要触碰管口及管壁。接种后的试管应立即贴标签，写上菌号及日期，进行适温培养。

（四）结束工作

菌种移接完毕，将酒精灯盖灭，用95%酒精瓶盖上。然后，打开侧门，取出试管。将接种箱的汽水擦干，清除箱内的残留物，将酒精灯、酒精瓶、接种铲等用具摆放整齐。

三、考核评价

（1）菌种移接的全过程为什么要在火焰上方进行？

（2）指出菌种移接进程中的关键技术。