木耳的制种技术

任务二　木耳的制种技术

在食用菌种的培养上，我们把从黑木耳身上和从耳棒中分离出来的菌丝称母种，把母种扩大到锯木培养基上进行培养，产生的菌丝称原种，再把原种经过繁殖培养成栽培种用于生产。

一、母种制种技术

用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种，用于生产的母种，即为生产母种，可用于扩接原种。

（一）母种培养基制作方法

1．培养基配方

综合马铃薯培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0.5g，维生素B₁10mg，琼脂20g，水1000mL，pH值自然。

合成培养基：马铃薯20g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，酵母膏5g，硫酸镁0.8g，水1000mL，pH值自然。

2．培养基制作操作流程

（1）配制。先将马铃薯洗净去皮切成薄片，称取200g，加水1000mL，煮沸15～20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000mL，加入琼脂20g，再加热，琼脂溶化后，再加入其他配方中的药品。

（2）培养基的分装。应在培养凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固），一般用漏斗或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为试管长度1/4。装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。

（3）灭菌。将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在1kg/cm²压力下（锅入温度达121℃）灭菌20分钟，使微生物包括芽孢全部杀死。待压力降到零时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。

（二）母种接种、培养

通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃，3天后将温度降至24℃继续培养，12～15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成（生产）母种。

二、原种制种技术

母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。

（一）原种培养基制备

1．原种培养基配方

木屑麸皮培养基：阔树木78%，麸皮20%，糖1%，石膏粉1%，水65%，pH值自然。

棉籽壳木屑混合培养基：棉籽壳90%，糖1%，麸皮5%，过磷酸钙3%，石膏粉1%，pH值自然。

2．原种培养基制作流程

（1）拌料。选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀地混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶解后，按上述干料量加入水，比例为1：1.3拌匀，培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。堆闷30分钟后装瓶（袋）。

（2）分装瓶（袋）。用机械或人工装袋稍加压实。塑料袋规格通常为9cm×21cm×0.04cm，在袋口外套入塑料环，像瓶子一样，然后在袋口内塞松紧适宜棉塞或用牛皮纸包扎好。

（3）灭菌。原种灭菌方法有两种，高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌又称加压蒸气灭菌，灭菌原理：在高温（120℃）、高压（1kg/cm²）条件下灭菌两小时，将芽孢在内的微生物全部杀死。常压灭菌称流通蒸气灭菌，由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度变动在90℃～103℃，其热力、穿透力不强，在一定温度下维持足够时间达到灭菌目的，通常在100℃下维持8～10小时。

（二）接种与培养

用接种箱或接种室接种，在接种前，需对接种箱或接种室用0.2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理，然后将灭菌过的料瓶（袋）放入接种箱或接种室内，用紫外线灯照射30分钟后，在无菌条件下进行接种。或在接种前用烟雾剂密闭熏蒸消毒，即烟雾剂点燃消毒时应关闭门窗。接种室消毒，一间房需点燃3盒50g规格烟雾剂；接种箱消毒每次仅用4g。母种试管每支可接4～6瓶（袋）原种。将接种后的菌种瓶（袋）放入发菌室培养。培养室温度22℃～26℃，相对湿度为80%以下，光线为弱散射光，发菌期间应保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶（袋）需30～40天。

三、栽培种制作技术

原种进一步扩繁，即为栽培种。栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、发菌管理与原种用塑料袋制备时一致。栽培种一般采用塑料袋制备，规格为15cm×33cm×0．05cm，用无棉盖体封口。一瓶原种可接50瓶（袋）栽培种。

四、菌种质量鉴定

菌种质量不仅与能否成功发菌有关，也关系到产量和效益，从事木耳栽培必须严把好质量关。菌种的质量鉴定有两个方面的含义：一是分离培养的菌种是否是栽培所需种类；二是菌种是否为优良菌株。黑木耳菌种正常菌丝应洁白，生活力旺盛，发菌培养45天后，瓶（袋）间自上而下会出现菊花状或梅花型胶质原基，颜色明褐至黑褐色。如果瓶（袋）底积淡黄色液体，或上半部出现黄色黏液，培养基收缩，为过期老化菌种，应予淘汰。

如果菌种菌丝仅发至瓶（袋）1/3～1/2处时出现淡黑色的胶状耳基，说明菌种早熟，或扩大次数太多，或由于培养室光线过强。若菌丝只长一个角落而不蔓延，可能是培养基太干、过湿或干湿不均引起。若菌丝蔓延停滞不前，并有一明显抑制线，多为杂菌所致。在发菌过程中，发现杂菌应及时检出不用。

五、木耳菌种的鉴别

菌丝洁白，呈细羊毛状，毛短整齐，浓密，粗壮有力，齐头并进地延伸至瓶底，生长均匀，上下一致，挖出来成块，不松散。

菌丝长满瓶后，在菌体表面一般会分泌出褐色水珠。以后在瓶壁四周和表面出现浅黄色透明胶质耳芽。

菌种柱与瓶壁紧贴，瓶内壁附有少量白色水珠的为新鲜菌种。若瓶底有浅黄色积水，菌柱离壁干缩，为老化菌种，不能使用。

正常的菌种有木耳特有的芳香气味，若有臭味和霉味，或出现斑块状及球状不发菌的现象，是细菌污染，若有其他红、绿、黄、黑等色，说明已被杂菌污染，也不能使用。

培养基与瓶壁之间若出现浅黑色的胶质物（耳基），说明是早熟或扩接次数过多的菌种，栽培后耳片小，数量多，不易长大，品质差，产量低，应予淘汰。

若瓶内可以看到木颗粒而菌丝很少，说明培养时间太短，应继续培养。若培养一段时间后没什么显著变化，说明培养基营养不足，应予补充。

如果菌种长至一半左右或一个角落不再继续生长，可能是太干或太湿。若菌丝生长整齐，浓密，突然出现稀疏，并有一明显的分界，说明上部料适中，下部压得过实过密。

知识拓展

木耳菌种的保藏

食用菌菌种的衰退是一种常见的现象，采用合适的保藏方法、尽量减少菌种的传代次数，是防止菌种衰退的有效措施之一。菌种保藏原理是使其新陈代谢作用降低，保藏的方法很多，现主要介绍两种。

1.斜面低温保藏法

这是一种最简单的保藏法，即将生长旺盛无污染的斜面试管放入冰箱内，在4℃～6℃的低温下保藏，以后每隔2～3个月移接于新鲜的斜面培养基上，培养后再继续保藏（以补充菌丝的养分和水分，防止菌丝老化）。

2.液体石蜡保藏法

此法是在要保藏的斜面试管内，在无菌室内注射灭过菌的液体石蜡，注入蜡以高出斜面1cm为宜。其目的是使菌种与空气隔绝，降低其新陈代谢活动。然后塞以木塞或橡胶塞，用蜡封口后，直立放入室内干燥处，可保存一年以上。使用时只要用接种针从斜面上挑取少量菌丝，移植在新鲜的斜面培养基上，由于菌丝沾有石蜡，必须再转接一次试管才能很好生长。