双孢蘑菇的制种技术

任务二　双孢蘑菇的制种技术

双孢蘑菇菌种制作分母种、原种、栽培种三个逐步扩大的阶段。实践证明，双孢蘑菇菌种的好坏优劣，不仅直接影响到双孢蘑菇的产量和质量，而且关系到双孢蘑菇栽培的成败。

一、双孢蘑菇母种的制备

（一）培养基配制

1.马铃薯葡萄糖培养基

配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL。

制作方法：选择质量好的马铃薯，去皮，挖去芽眼，削掉青绿部分，切成1～2mm厚薄片，称取200g，加水1000mL，煮沸后，小火保持30分钟，然后用八层沾湿纱布过滤，滤液中加入琼脂，继续加热，并不断用玻璃棒搅拌直至琼脂完全溶化，加葡萄糖搅匀，最后用清水补足至1000mL，即可进行分装。

2.综合马铃薯培养基

配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，维生素B₁10mg（一片），水1000mL。

制作方法：同马铃薯葡萄糖培养基，在加入葡萄糖同时加入磷酸氢二钾、硫酸镁、维生素B₁等。

3.堆肥浸汁葡萄糖培养基

配方：堆肥（干）100g，葡萄糖20g，琼脂18～20g，水1000mL。

制作方法：先把堆肥剪碎成1～2cm长，加入水1000mL煮沸后，用小火保持30分钟，随后的过程同上。

（二）分装

上述制备的母种培养基，趁热时尽快分装试管。用玻璃漏斗夹在铁架台上，下接一段乳胶管，用弹簧夹夹住胶管，左手握试管，右手控制培养基流量，使每支试管装量相当于试管长度的1/4左右（图5-2）。

图5-2　培养基的分装

（三）塞棉塞

1.方法一

用手把棉絮做成棉塞塞入试管，松紧度以检查时用手抓住棉塞不脱落为准。棉塞要紧贴管壁不起皱纹，棉塞塞入管中的部分约为2cm左右，外露部分约占棉塞总长的1/3。

2.方法二

事先把棉絮用纱布包扎成塞子，规格是根据不同试管大小而定，松紧度以及塞入试管的要求同上。

（四）灭菌

将制好的试管培养基包扎成一捆，在棉塞上盖上一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞，5～7个扎成一捆，随后放入手提式高压锅中进行灭菌，灭菌温度达121℃维持30分钟，具体操作要求参照高压蒸汽灭菌法。停火自然降压至零后，打开高压锅盖。

（五）摆斜面

将灭菌后的试管趁热放入摆斜面的专用木框内，木框底部前边支一小木块使之稍倾斜，使木框内的试管培养基摆成斜面，一般长度的为试管的2/3即可，摆好斜面后在上面盖一保温棉，防止试管冷却过快产生太多的冷凝水。

（六）检验

制好的斜面要进行灭菌质量检查。随机抽取数根已灭菌的试管培养基放在28℃～30℃下进行3天空白培养，检查确实没有污染杂菌，斜面才能正式接种使用。

（七）接种

接种前，把培养基放入接种箱中进行消毒，消毒要求按前述进行。接种时，手和接种针用75%的酒精棉球揩擦，点燃酒精灯，使火焰周围空间形成无菌区，左手拿起供接种用的斜面试管，试管斜面要向上。右手大拇指和食指持接种针，在酒精火焰上灼烧灭菌。将左手试管移至火焰旁，用右手的小指、无名指和手掌，在火焰旁夹下试管的棉塞，将试管口在火焰上稍微烤一下，以杀灭管口上的杂菌，随后将管口移至距火焰1～2cm处，用冷却了的接种针将种菇纵横切割成许多小方块，然后挑取一小块，迅速移入被接试管斜面的中前部，轻轻抽出接种针，再烤一下试管口，迅速塞上棉塞，如此连续操作。

（八）贴标签培养

逐支试管正面的上方贴上标签，写明菌种编号、接种日期，随后把试管置培养箱（室）中24℃下培养。

二、双孢蘑菇原种和栽培种培养基的制备及菌种制作

双孢蘑菇原种的培养基，常用的有粪草培养基和谷粒培养基。栽培种的培养基种类很多，可用粪草培养基、粒培养基，也可用河泥牛粪培养基，砻糠、河泥、猪牛粪培养基等等。但就国内目前使用的情况看，栽培种以粪草培养基为多数。

（一）粪草培养基——麦草菌种

以禽畜粪与麦草为主要原料，粪、草应预先做好准备，及时晒干，妥善贮藏。配方为干麦草50%，干粪50%，石膏粉0.5kg，加水适量，进行堆制发酵。将麦草充分预湿，粪用水拌湿，然后一层草、一层粪做成宽2m，高2m，长度不限的料堆，边堆制边适量浇水，掌握上层多浇，下层少浇，水要浇在草上，建堆后第二天见堆基四周有少量水流出为宜。堆后5～6天第一次翻堆，同时加入石膏，以后每隔4～5天翻堆一次，翻三次后，麦草柔软呈咖啡色，即可将麦草取出晒干备用。

1.制原种

将发酵过的麦草切成1寸长左右，取50kg草加石膏粉0.5kg，水80kg（含水量65%），充分拌和，就地堆放1～2小时，让水透入料内后即可装瓶。装瓶时松紧要适中，上下要一致。过松发菌虽快，然而上部菌丝容易衰老，产生“退菌”现象；过紧则通气不良，发菌缓慢。料装好，用锥形木棒在料中央打一个洞直至接近瓶底，目的是增加料内通气量，利于菌丝生长。料装好，用清水洗净瓶口内壁及瓶外污物，待瓶口干后，塞上棉塞进行灭菌。灭菌压力2kg/cm²，时间2～3小时。或用土蒸锅灭菌，水沸腾后连续蒸煮6～10小时，再焖一夜。取出后放在干净的室内冷却，并用千分之一的高锰酸钾溶液把瓶表面擦净，放入接种箱内接种操作。接原种是挑母种菌丝一小块，连同培养基放入麦草培养料瓶内，一般1支母种可接4～5瓶原种；接栽培种是用麦草原种做菌种，接入麦草或其他培养基中，一般1瓶原种可接50～60瓶栽培种。因瓶口表面1寸左右的菌丝较衰老，且杂菌感染的可能性较大，所以接种时要将其弃去不用。菌种接好后立即放入培养室内培养，室温保持在20℃～25℃，空气相对湿度在65%左右。

2.制栽培种

由于数量大，又都在自然温度下培养，制种季节又在梅雨季节，故必须做好降温、降湿工作，室内可撒放生石灰以吸湿，同时要加强通风，菌种瓶叠放层数不能太多。培养期间要加强管理，及时检查。原种和栽培种，一般接种后3～5天后菌丝恢复生长，5～7天后菌丝开始长入料内。一星期左右要全面检查有无杂菌感染，以后每隔两三天检查一次，如有杂菌或虫害发生要及时淘汰。经50～60天菌丝即可长满全瓶。

（二）谷粒培养基——谷粒菌种

谷粒有小麦、黑麦、高粱、小米等。制种前要先对麦粒进行处理，取饱满无杂物的小麦10kg，淘洗干净，加水15kg烧煮，保持水沸15分钟，然后熄火，在沸水中浸15分钟后沥干，摊开晾干麦粒表面水分。制种时取熟麦粒10kg，加石膏135g、碳酸钙35g，拌匀后装瓶，在1.5kg/cm²的压力下灭菌两小时，冷却后接种，25℃左右培养，在培养过程中要经常检查有无杂菌、虫害感染，还要经常摇动菌种瓶，让麦粒松动，使发菌速度上下较为均匀一致。

（三）河泥牛粪培养基——河泥菌种

将肥沃的湿河泥与经粉碎的干牛粪以1：1（体积比）混合，堆成馒头状自然发酵一周，然后摊开晒干，粉碎贮藏。制种时用2%石灰清水拌料，含水量掌握以手能捏成团，甩下能散开为宜，pH值调到9左右，然后装瓶，在2kg/cm²压力下灭菌4小时，冷却后接种、培养（同粪草菌种）。

（四）砻糠、河泥、猪牛粪培养基——砻糠菌种

将河泥与猪牛粪按1：1（体积比）混合堆制发酵，同时将砻糠与猪牛粪也按1：1混合堆制发酵，然后再将两种发酵后的料按1：1混合，调节适当湿度，pH值调至9左右，装瓶后在2kg/cm²压力下灭菌3～4小时，冷却后接种培养。

知识拓展

双孢蘑菇的主要栽培品种

1.As2796

半气生型，菌盖厚，不易开伞，成菇率高，子实体生长适宜温度14℃～20℃。耐肥水，转潮快，高产，是国内大面积栽培的主要品种。

2.F56

匍匐型，耐水、耐肥。菇体圆整，中小型，无鳞片，菇质致密，高产。转潮决，出菇整齐，菇潮均匀，子实体生长最适为15℃～17℃，抗逆性强。

3.新登96

高温型，出菇温度20℃～32℃，抗高温，耐贮藏。

4.Asl671

气生型，出菇适温12℃～18℃，较耐肥水，转潮不明显，后劲较强。

思考与练习

1.介绍双孢蘑菇的母种、原种、栽培种的培养基配方。

2.简述双孢蘑菇的原种制种过程。

3.简述影响双孢蘑菇原种制种过程的因素。