草莓无病毒苗的培养及脱毒方法

培育草莓无病毒苗的方法有热处理脱毒法、花药培养法和茎尖组织培养法。

最早由日本人石上（1963年）用热治疗法培育成草莓无病毒母株。由此采用恒温和变温的热空气处理在草莓脱毒上发展迅速，而且脱毒效果较好。热治疗之所以能去除病毒而不是杀死病毒，主要是利用一些病毒对热的不稳定性，在高于常温的温度下即钝化失活，使之不能增殖，并丧失感染能力。因此在高温下，病毒颗粒的增殖与破坏的平衡被打乱了，以致病毒含量不断降低，这样持续一段时间以后，病毒自行消灭而达到脱毒的目的。但是，由于草莓病毒种类不同，有的病毒用热治疗法容易脱毒，有的则难以脱除。

草莓病毒病热治疗脱毒过程如下。

（1）培育准备热治疗的盆栽草莓苗，要注意根系生长健壮，严禁移栽后马上进行热治疗，最好在栽培后生长1～2个月再进行，以增加对高温的抵抗能力。

（2）热治疗过程中的空气湿度不能过高，一般维持在50%～70%，盆栽苗的土壤水分应保持在草莓生长不萎缩的程度为宜。

（3）防止花盆中水分蒸发，增加空气湿度，可把花盆用塑料袋包上，或改用塑料花盆。

（4）热治疗的盆栽草莓，最好带较成熟的老叶，以提高苗子的抗热能力。

（5）用35～38℃变温处理，可延长草莓在热治疗中的生长时间，提高成活率。

热治疗需要掌握的是处理好时间与温度，因病毒种类不同而异。如草莓斑驳病毒，用热治疗比较容易脱除，在38℃恒温条件下，处理12～15天即可脱除；草莓轻型黄边病毒，热治疗虽能脱除，但处理时间较长，一般需50天以上；草莓镶脉病毒，因耐热性强，用热治疗不容易脱除。草莓皱缩病毒，也需要38℃恒温条件下，处理50天以上才有效。

1974年日本大泽胜次等，首先发现草莓花药培养出的植株可以脱毒病毒，并得到了植物病理学家和植物生理学家的证实，现在作为培育草莓无病毒苗木的方法之一，已被广泛应用。草莓花药培养脱毒的技术和培养程序如下。

（1）接种时期与材料消毒。在草莓现蕾时摘取发育程度不同的花蕾，用醋酸洋红染色，压片镜检，观察花粉发育时期。当花粉发育到单核期时，即可采集花蕾剥取花药接种。如果没有染色压片和镜检的条件，可以掌握花蕾的大小，观察花蕾发育到直径4毫米左右，花冠尚未松动时采集花蕾。

采集的花蕾先用流水冲洗30分钟，在4～5℃的低温条件下放置24小时，然后在无菌条件下消毒。方法是将花蕾首先浸入70%的酒精中半分钟，再浸入10%漂白粉上清液或0.1%升汞水中消毒10～12分钟，倒出消毒液，再用无菌水冲洗4～5次。取出花蕾，用镊子小心剥离花药，放到灭菌后的培养基中，每个培养瓶内接种30～40个花药，然后放到培养室进行培养。

（2）培养方法。

1）愈伤组织诱导。草莓花药接种在MS+6-BA1.2毫克/升+NAA0.3毫克/升+蔗糖30克/升+琼脂粉6克/升、pH6.0左右的愈伤组织诱导培养基上，26℃培养3周左右可诱导出小米粒状乳白色或淡绿色大小不等的愈伤组织，当愈伤直径长到3～4毫米时即可转分化培养。

2）植株分化。将愈伤转移到MS+6-BA1.0毫克/升+IBA0.2毫克/升+蔗糖30克/升+琼脂粉6克/升、pH6.0左右的培养基上，26℃培养1～2个月可以分化出绿色小植株。因品种而异可以对激素浓度进行适当调整，以提高植株的分化率。

3）植株繁殖和生根。小植株可以在MS+6-BA 0.8毫克/升+IBA 0.1毫克/升+蔗糖30克/升+琼脂粉6克/升、pH6.0左右的培养基上快速繁殖多代。将增殖的植株转移到1/2 MS+ NAA 0.05毫克/升+IBA 0.05毫克/升+蔗糖30克/升+琼脂粉6克/升、pH6.0左右的生根培养基上，10～15天几乎100%的植株生根，根的质量好，容易移栽成活。

草莓茎尖分生组织培养可以有效地脱除病毒，获得无病毒植株。茎尖培养之所以能去除病毒，是由于病毒在植株上分布不一致，即老叶片及成熟的组织和器官中病毒含量较高，而幼嫩及未成熟的组织和器官中病毒含量很低，生长点（0.1～1.0毫米区域）则几乎不含或含病毒非常少。茎尖培养法脱毒效果好，后代遗传性稳定，是目前草莓无病毒苗培育应用最广的一个途径。既要考虑脱毒效果，又要考虑提高成活率，因此一般切取0.2～0.5毫米，带1～2个叶原基的茎尖作培养材料较好。

草莓茎尖培养脱毒方法和程序如下。

（1）取材和消毒。在选取田间生长健壮的匍匐茎顶端4～5厘米长的芽子多个，先用1.5%洗衣粉水洗刷表面活物及绒毛，再用流水冲洗30～45分钟。在无菌条件下将冲洗后的材料截成2厘米左右，先浸入70%的酒精中半分钟，再浸入10%漂白粉上清液或0.1%的升汞中消毒10～15分钟，然后再用无菌水冲洗4～5遍。将消毒后的材料用镊子夹到盛有滤纸的无菌培养皿中，放到双目解剖镜下，用解剖针轻轻剥取茎尖分生组织，一般保留1～2个叶原基，切取0.2～0.5毫米，立即放入三角培养瓶中，每瓶放5～6个茎尖。

（2）诱导芽分化和小植株增殖。

1）诱导芽分化。切取草莓茎尖分生组织接种在MS+6-BA1.0毫克/升+IBA0.1毫克/升+GA0.1毫克/升，蔗糖30克/升，琼脂粉6克/升。pH6.0左右，经高压灭菌消毒20分钟的培养基中。培养温度25～28℃，光照强度1000～2000勒克斯，光照每天10～12小时。培养30天左右即开始分化新芽，新芽不断生长和增殖，便形成一堆幼嫩的小芽丛。

2）小植株增殖。将小芽丛发分离成若干个小植株，再转移到新鲜培养基即MS+6-BA0.7毫克/升+IBA0.1毫克/升上进行继代培养，即可达到植株增殖的目的。一般每个小芽丛能分离出7～8个小植株，25天后小植株又分化成一堆芽丛，一般平均每个月可达1∶7以上的增殖倍数。

（3）诱导生根和植株移栽。

1）诱导生根。草莓试管苗生根较容易，将3厘米以上的试管苗切取下来，接在1/2 MS+ NAA 0.05毫克/升+IBA 0.05毫克/升+蔗糖30克/升+琼脂粉6克/升、pH6.0左右的生根培养基上，10～15天几乎100%的植株生根。

2）小植株移栽。瓶内生根的植株，移栽前需经过光照锻炼3～7天，再开盖锻炼1～2天的驯化过程后，以草炭、锯末、沙等基质中的一种或几种，与土以一定比例混合的苗床上移栽，栽后注意扣膜、保温、保湿，移栽成活率可达90%以上。