试验方法与结果

用HPLC法测定黄酮类成分的含量。

5.3.2.1　色谱条件

迪马C18柱，250 mm×4.6 mm×0.5 μm；流动相：甲醇-水（0.025 moL·mL－1）、磷酸（40∶60），流速：1 mL·min－1；波长：360 nm；柱温：室温。

芦丁理论塔板数不得低于5 000。

5.3.2.2　对照品溶液的制备

精密称取（减压干燥）芦丁对照品5.01 mg，置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇制成0.020 04 mg·mL－1溶液。

5.3.2.3　供试品溶液的制备

取款冬花样品粉碎（过20目筛），60 °C干燥至恒重，分别精密称取上述样品各1.0 g，置于索氏提取器中，加乙醇65 mL，回流提取3 h，过滤，减压回收乙醇，残留物加少量甲醇溶解，并定容于2 mL容量瓶中，摇匀，作为样品溶液备用。

对照品与供试品的HPLC图谱见图5.2。

图5.2　黄酮类成分的HPLC图谱

5.3.2.4　标准曲线的制作

精密吸取样品溶液2，4，6，8，10，15，20，25 μL进样测定，以峰面积（Y）对样品进样量（X，μg）进行线性回归，得芦丁回归方程为Y＝6 934.5X－3 365，r＝0.999 9，表明芦丁在进样量0.040 08～0.400 8 μg范围内呈良好的线性（图5.3）。

图5.3　芦丁标准曲线图

5.3.2.5　稳定性试验

取供试品溶液，室温下每6 h进样分析1次，连续测定5次，芦丁平均峰面积的RSD为1.4%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

5.3.2.6　精密度试验

精密吸取上述0.020 04 mg·mL－1的对照品溶液，连续进样5次，每次10 μL，芦丁峰面积的RSD为1.01%。表明测定结果精密度良好。

5.3.2.7　重复性试验

分别精密称取同一批栽培款冬花5份，照5.3.2.4项下方法操作，测定峰面积并计算，得峰面积和黄酮类成分含量的RSD均小于1.37%。

5.3.2.8　加样回收率

精密称取已知含量的同一批次样品5份，每份精密加入芦丁对照品溶液1 mL（0.020 04 mg·mL－1），按5.3.2.3中方法制备供试品溶液，照上述方法测定；分别测得不同产地的款冬花样品加样回收范围在97.80%～102.8%（表5.5）。

表5.5　不同产地款冬花回收率