实验实训三 MS培养基母液的配制与保存
一、实验实训原理
植物组织培养中培养基的配制是最基础的工作，培养基中有十几种化学物质，配制起来很不方便，微量元素和植物激素用量很少，每次配制培养基都要称量，不仅费时费工，而且也不准确。因此培养基制备之前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液（即浓度较高的储备液）。当制备培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。根据营养元素的类别和化学性质，母液一般可分别配成大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液和生长调节物质母液。
二、实验实训目的
能够根据配方准确计算各种药品的称取量，掌握MS培养基母液、生长调节物质母液的配制与保存技术。
三、实验实训材料与用品
MS培养基配方中所需各种药品、NAA、6-BA、IBA、1 mol/L的NaOH、1 mol/L的HCl、95%酒精、蒸馏水、电子天平（精确度为0.01 g、0.001 g、0.000 1 g）、烧杯、玻璃棒、磁力搅拌器、量筒、容量瓶、贮液瓶（棕色、无色）、标签、冰箱等。
四、实验实训步骤
（一）大量元素母液的配制与保存
大量元素母液是指N、P、K、Ca、Mg、S等大量元素的混合液。一般配制成10倍或20倍的母液。配制时要防止沉淀，各种药品要分别称量、分别溶解，充分溶解后再混合。混合时若Ca2+和SO42-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生硫酸钙或磷酸钙沉淀，因此不能配在一起作母液贮存，应分别配制和保存。
1.计 算
确定MS培养基，一般大量元素母液扩大10倍或20倍，配制的升数根据用量和现有容量瓶的体积，一般为1 L，计算出各种药品的称取量，列于表中，如表2-2所示。
表2-2 MS培养基母液配制表 配制日期：
2.称 量
选择相应的药品按顺序排好，大量元素的称量用精确度为0.01 g的天平，称量时用硫酸纸避免药品沾到纸上影响准确性；钥匙要专药专用，避免混用；称量的量快到时，要轻轻拍打手臂，以防止称量过量；称好的药品要做好记号，以防止漏称或重复。
3.溶 解
在烧杯中加入母液配制体积的60%～70%的蒸馏水和去离子水，将称量好的药品按顺序加入，当一种药品完全溶解后再加入另外一种，直至该母液的所有药品全部溶解。在溶解的过程中对于难溶的药品可以加热溶解，加热的温度为60～70 °C为宜；大量元素配制时后加钙，否则易出现沉淀。
4.定 容
将完全溶解后的溶液倒入相应的容量瓶中，用蒸馏水或去离子水冲洗烧杯3～4次，将洗液完全移入容量瓶内，加水定容至刻度线，摇匀。
5.标 记
将配制好的母液倒入贮液瓶中，铁盐母液要用棕色瓶保存。瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、扩大倍数与配制日期。
6.保 存
将母液瓶储放在4 °C左右的冰箱中保存，定期检查有无沉淀生成，如出现沉淀，应重新配制。
（二）微量元素母液的配制与保存
1.计 算
微量元素母液是指含除Fe以外的Mn、B、Zn、Cu、Mo、Co等微量元素的混合液。微量元素母液一般配制成100 倍或200 倍的母液。各种药品要分别称量、溶解，然后再混合，如表2-3所示。
表2-3 MS培养基母液配制表 配制日期：
2.称 量
选择相应的药品按顺序排好，根据药品的称量选择适当的天平，微量元素称量用0.000 1 g的天平。
3.溶 解
在烧杯中加入母液配制体积的60%～70%的蒸馏水和去离子水，将称量好的药品按顺序加入，当一种药品完全溶解后再加入另外一种，直至该母液的所有药品全部溶解。
4.定 容
将完全溶解后的溶液倒入相应的容量瓶中，用蒸馏水或去离子水冲洗烧杯3～4次，将洗液完全移入容量瓶内，加水定容至刻度线，摇匀。
5.标 记
将配制好的母液倒入贮液瓶中，铁盐母液要用棕色瓶保存。瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、扩大倍数与配制日期。
6.保 存
将母液瓶储放在4 °C左右的冰箱中保存，定期检查有无沉淀产生，如出现沉淀需重新配制。
（三）铁盐母液的配制与保存
1.计 算
由于Fe2+在水溶液中不稳定，容易与OH-或其他离子结合而发生沉淀，需单独配制。一般用FeSO4·7H2O和Na2-EDTA配制成铁盐螯合剂比较稳定。一般配制成100倍或200倍的母液，配制1 L，计算出各种药品的称取量，列于表中，如表2-4所示。
表2-4 MS培养基母液配制表 配制日期：
2.称 量
铁盐称量用精确度为0.01 g的天平。
3.溶 解
先用少量蒸馏水分别将Na2-EDTA加热熔解，然后倒入FeSO4·7H2O溶液中充分搅拌并加热5～10 min。
4.定 容
将完全溶解后的溶液倒入相应的容量瓶中，用蒸馏水或去离子水冲洗烧杯3～4次，将洗液完全移入容量瓶内，加水定容至刻度线，摇匀。
5.标 记
将配制好的母液倒入贮液瓶中，铁盐母液要用棕色瓶保存。瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、扩大倍数与配制日期。
6.保 存
将母液瓶储放在4 °C左右的冰箱中保存，定期检查有无沉淀产生，如出现沉淀需重新配制。
（四）有机物母液的配制与保存
1.计 算
有机物母液主要是维生素和氨基酸类物质，一般配制成100倍或200倍的母液，配制1 L，计算出各种药品的称取量，列于表中，如表2-5所示。
2.称 量
有机物的称量用0.000 1 g的天平。称量时用硫酸纸，避免药品沾到纸上影响准确性。
3.溶 解
在烧杯中加入母液配制体积的60%～70%的蒸馏水和去离子水，将称量好的药品按顺序加入，当一种药品完全溶解后再加入另外一种，直至该母液的所有药品全部溶解。
表2-5 MS培养基母液配制表 配制日期：
4.定 容
将完全溶解后的溶液倒入相应的容量瓶中，用蒸馏水或去离子水冲洗烧杯3～4 次，将洗液完全移入容量瓶内，加水定容至刻度线，摇匀。
5.标 记
将配制好的母液倒入贮液瓶中，铁盐母液要用棕色瓶保存。瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、扩大倍数与配制日期。
6.保 存
将母液瓶储放在4 °C左右的冰箱中保存，定期检查有无沉淀产生，如出现沉淀需重新配制。
（五）生长调节物质母液的配制
每种生长调节物质必须单独配成母液，浓度一般配成0.1～1.0 mg/mL，用时根据需要取用。因为生长调节物质用量较少，一次可配成50 mL或100 mL。
1.计 算
确定各种生长调节物质的配制浓度和配制体积数，计算生长调节物质的称取量，如表2-6所示。
表2-6 生长调节物质母液配制表 配制日期：
2.称 量
选择相应的药品，根据药品的用量选择适当的天平称量，其他同MS母液配制。
3.溶 解
多数生长调节物质不溶于水或难溶于水，要先用适当的溶剂溶解，一般IAA、IBA、GA3、ZT、ABA等先溶于少量的95% 的酒精中，再加水定容；NAA可先溶于热水或少量95%的酒精中，再加水定容；2，4-D可用少量1 mol/L NaOH溶解后，再加水定容；KT和6-BA先溶于少量1 mol/L的HCl中，再加水定容。
4.定 容
将完全溶解后的溶液倒入相应的容量瓶中，用蒸馏水或去离子水冲洗烧杯3～4 次，将洗液完全移入容量瓶内，加水定容至刻度线，摇匀。
5.标 记
将配制好的母液倒入贮液瓶中，铁盐母液要用棕色瓶保存。瓶上贴好标签，注明母液名称、扩大倍数与配制日期。
6.保 存
将母液瓶储放在4 °C左右的冰箱中保存，定期检查有无沉淀产生，如出现沉淀需重新配制。
【知识拓展】
母液的配制方法不仅可以按照元素含量、性质来配制，也可以把同类盐配制成一种母液，这种方法配制的母液在常温下可储存，不必放入冰箱中，如表2-7所示。
表2-7 MS培养基配制表 配制日期：
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