药用植物的组织培养技术

任务四　药用植物的组织培养技术

一、芦荟的组织培养技术

芦荟（Aloe vera var.Chinensis，见图7-27）别名卢会、讷会、象胆、奴会、劳伟，为被子植物门、单子叶植物纲、天门冬目、百合科、芦荟属多年生常绿草本植物。芦荟原产于地中海、非洲热带干旱地区，分布几乎遍及世界各地。在印度和马来西亚一带、非洲大陆和热带地区都有野生芦荟分布。中国的福建、台湾、广东、广西、四川、云南等地均有栽培。芦荟叶簇生、大而肥厚，呈座状或生于茎顶，叶常披针形或叶短宽，边缘有尖齿状刺；花序为伞形、总状、穗状、圆锥形等，色呈红、黄或具赤色斑点，花瓣6片、雌蕊6枚，花被基部多连合成筒状。芦荟是集药用、食用、美容及观赏于一身的花叶兼备的观赏性植物；芦荟有神奇的功效，对各种烫伤、烧伤、晒伤及皮肤病有不同程度的疗效，具有消炎、抗菌、抗肿瘤等药理作用，对增强人体免疫功能，抑制癌细胞扩散也有显著疗效。

图7-27　芦荟

（一）外植体选择

取其具有芽点的茎段作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

选取1～2年生幼芽，用自来水冲洗干净，剪去3/5叶片，用饱和中性洗衣粉溶液搅动漂洗15 min，用自来水冲洗20 min，用无菌水冲洗2次，先用75%的酒精消毒0.5～1 min，再用0.1%的HgC12溶液消毒8～10 min，用无菌水冲洗5次，放在无菌滤纸上吸干水分，将叶片一层层剥掉，露出芽点，轻切茎段两端（不要切到芽点处）为外植体以供接种用。

（三）培养基及温光条件

基本培养基为MS；芽诱导培养基：① MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L；不定芽增殖培养基：② MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L或③ MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L；生根培养基：④ 1/2MS+NAA 0.8 mg/L。

上述培养基均加蔗糖3%，琼脂0.7%，pH为5.8。培养温度为23～27 °C，光照时间为10～12 h/d，光照度为1 500～2 000 lx。

（四）不定芽诱导与增殖

将灭过菌的外植体接种到培养基①上，7 d后外植体开始转绿，20 d后芽点开始萌动生长，不定芽开始分化，35 d左右茎段芽点诱导0.2～1.0 cm形成丛芽，再生率达75%～95%，平均每个外植体再生不定芽2.7～4个。将诱导出的丛芽切下，交替使用培养基②和③进行增殖效果较好。在培养基②中，培养35 d增殖3～4倍；在培养基③中，培养35 d可增殖5～6倍。

（五）生根与炼苗移栽

将培养基②和③中1.0～3.0 cm的丛生芽单个切下，接种到生根培养基④中，培养7 d左右，肉眼可见根原基突起，15～20 d平均生根3～8条。将长0.5～1.0 cm的生根试管苗移至晾苗间晾苗5～7 d后，从培养瓶内取出小苗，洗净根部培养基，移植于河沙和园土混合的基质中，浇透水，空气湿度不超过80%。移栽后的生根试管苗浇水不宜太勤，土干立即浇水，成活率可达95%以上。

二、川芎的组织培养技术

川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.，见图7-28）别名抚芎、小叶川芎，为被子植物门、双子叶植物纲、伞形目、伞形科、藁本属多年生草本植物，株高20～60 cm。川芎主产四川，在云南、贵州、广西、湖北、江西、浙江、江苏、陕西、甘肃、内蒙古、河北等省区均有栽培。四川省川西平原的都江堰市、崇州、新都等地是川芎的主产区。川芎栽培历史悠久，药材质量较佳，驰名中外。其中川产川芎占全国总产量的 90% 以上，都江堰市占全国的65% 以上，并且个大、饱满、坚实、断面色黄白、油性足、香气浓郁，质量上佳。

川芎根茎发达，形成不规则的结节状拳形团块，具有浓烈香气；茎直立，圆柱形，具有纵条纹，上部多分枝，下部茎节膨大呈盘状（苓子）；茎下部叶具柄，基部扩大成鞘，叶片轮廓卵状三角形，3～4回三出式羽状全裂，羽片4～5对，卵状披针形，末回裂片线状披针形至长卵形，具小尖头，茎上部叶渐简化；复伞形花序顶生或侧生；幼果两侧扁压。

川芎以干燥的根茎入药，是常用的中药材之一，有活血行气、祛风止痛、疏肝解郁的功能，主治头痛、胸肋痛、痛经、风湿痛、跌打损伤等症。

图7-28　川芎

（一）外植体选择

取其茎生叶叶柄作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

取茎生叶叶柄，用自来水洗净，并用无菌水冲洗2次，先用70%的酒精消毒20～30 s，然后再用0.1%的HgC12溶液消毒8～10 min，用无菌水冲洗4～6次，用无菌滤纸吸干水后，将叶柄切成约5 mm的切段为外植体以供接种用。

（三）培养基及温光条件

基本培养基为MS；愈伤组织诱导与增殖培养基：①MS+2，4-D 1.0～1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L；芽的分化培养基：②MS+6-BA 2.0 mg/L；生根培养基：③I/2MS+NAA 0.5 mg/L + IBA 0.5 mg/L。

上述培养基均加蔗糖2%，琼脂0.7%，pH为5.8。接种后将外植体置于20～26 °C条件下暗培养（5～9月）；外植体接种后置于18～22 °C条件下暗培养（10月份至次年4月份）。分化培养及生根阶段转为光培养，光照时间为8～10 h/d，光照度为1 500～2 000 lx。

（四）愈伤组织诱导与增殖

将灭过菌的外植体接种于培养基①上，培养10～15 d后叶柄切口处逐渐膨大；培养30 d左右时，从切段的一端或两端长出质地疏松的愈伤组织，初为白色，继续生长逐渐变为黄色；培养60 d后，愈伤组织诱导率达80%以上。将愈伤组织从外植体切下，转接到相同新鲜的培养基①上进行继代培养，每隔50～60 d继代1次，连续继代3～4次，愈伤组织仍保持很高的增殖能力和植株再生能力。

（五）芽的分化与生根

将继代3～4 次的愈伤组织转接于芽分化培养基②上，部分愈伤组织表面形成簇生的小圆粒状结构，然后从这种结构上继续增生，分化出许多绿色的不定芽，并发育成丛生小苗。可将这些愈伤组织切成小块转到相同新鲜培养基②上，仍能继续增殖和分化，由愈伤组织的粒状结构再生植株。将分化培养基上形成的无根苗切下转入生根培养基③上，7 d左右可生出较多的白色幼根，形成完整的小植株。

三、川贝母的组织培养技术

川贝母（Fritillaria cirrhosa Don.，见图7-29）为被子植物门、单子叶植物纲、百合目、百合科、贝母属多年生草本植物。川贝母分布较广，主产于我国四川、陕西、湖北、甘肃、青海和西藏。株高15～50 cm；鳞茎由2枚鳞片组成；叶通常对生，少数在中部兼有散生或3～4枚轮生的，条形至条状披针形，先端稍卷曲或不卷曲；花通常单朵，极少2～3朵，紫色至黄绿色，通常有小方格，少数仅具斑点或条纹，每花有3枚叶状苞片，苞片狭长；蒴果，棱上有狭翅。川贝母以鳞茎入药，有清热润肺、化痰止咳的功效，用于治疗肺热燥咳、干咳少痰、阴虚劳嗽、咳痰带血等症。

图7-29　川贝母

（一）外植体选择

其幼叶、花梗、花被及子房均可作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

于早春取尚未开花的花梗及花蕾，用饱和漂白粉溶液浸泡15～20 min，自来水冲洗后，用无菌水冲洗2 次，先用70%的酒精消毒20～30 s，然后用0.1%的HgC12溶液消毒2 min，用无菌水冲洗4 次，沥干水备用；如用鳞茎作外植体，可先剥去鳞片上的栓皮，用水洗净后，在0.1%的HgC12溶液中消毒20 min，用无菌水冲洗4～5次，用无菌纸吸干水分，切成方约5 mm、厚2 mm的小块为外植体以供接种用。

（三）培养基及温光条件

基本培养基为MS；愈伤组织诱导培养基：①MS+KT 1.0 mg/L+NAA 1.0～1.5 mg/L或②MS+2，4-D 0.5～1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L；分化培养基：③MS+6-BA 4.0～8.0 mg/L+ IAA 1.0～1.5 mg/L。

上述培养基均加琼脂0.7%，pH为5.8，培养基①、②加蔗糖4%，培养基③加蔗糖3%。培养温度为18～20　°C，光照时间为10 h/d，光照度为1 500～2 000 lx。

（四）分化培养与植株再生

将灭过菌的外植体接种于培养基①和②上，置于温度为18～20 °C、光照度为1 500～2 000 lx、光照时间为12 h/d的条件下，愈伤组织生长良好。愈伤组织在培养基①、②中可以长期继代培养，并不丧失生长和分化能力。将愈伤组织转移到分化培养基③上培养，愈伤组织可分化出白色的小鳞茎，且有根发生。所分化的小鳞茎在形态上与栽培得到的小鳞茎无差别，4个月内小鳞茎达到栽培条件下由种子繁殖所得到的2～3年生鳞茎大小。将这些小鳞茎置于2～15 °C低温黑暗下放置15～20 d后，再转入常温光照下，可以很快由鳞茎中央长出健壮小植株，以后按常规移栽，生长良好。

四、野葛的组织培养技术

野葛（Pueraria lobata，见图7-30）又名毒根、胡蔓草、断肠草、黄藤、火把花等，为被子植物门、单子叶植物纲、蝶形花科、葛属落叶攀援状灌木。野葛主要分布在海拔1 850 m的山谷杂木林缘，中国的四川、贵州、湖南、湖北、台湾均有分布。枝纤细，被短柔毛或无毛；叶大，偏斜，托叶基生，披针形，早落，小托叶小，刚毛状，顶生小叶倒卵形，先端尾状渐尖，基部三角形，全缘，上面绿色，无毛，下面灰色，被疏毛；总花梗长，纤细，簇生于总状花序每节上；荚果直，无毛，果瓣近骨质。野葛具肥厚的大块根，可入药，具有清热排毒、解痉镇痛、升阳解肌、透疹止泻、润肠通便的功效。

图7-30　野葛

（一）外植体选择

取其无菌子苗的叶块作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

取萌发10 d的种苗，用自来水洗净后，经70%的酒精消毒30 s，再用0.1%的HgC12溶液消毒10 min，并用无菌水冲洗5～6次后，将小苗子叶切成0.5 cm×0.5 cm的小块为外植体以供接种用。

（三）培养基及温光条件

基本培养基为MS；愈伤组织诱导与继代增殖培养基：①MS+2，4-D 1.0 mg/L+KT 0.5～1.0 mg/L；芽的诱导培养基：②MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；生根培养基：③MS+NAA 0.1 mg/L。

上述培养基均加蔗糖3%，琼脂0.8%，pH为5.8。培养温度为25 °C，光照时间为14 h/d，光照度为2 000 lx。

（四）愈伤组织诱导与增殖

将灭过菌的子叶块接种到培养基①上，20 d后产生浅绿色或浅黄色致密的愈伤组织。若不进行继代，愈伤组织会产生1～12条不定根并逐渐褐化死亡。若10 d继代1次，经4～5次继代后，子叶产生的浅绿色愈伤组织增殖，不褐变，也不产生不定根。

（五）芽的诱导

将增殖后的浅绿色愈伤组织切块，转接到芽的诱导培养基②上，20 d后，浅绿色致密愈伤组织分散成透明状，呈圆球形或瘤状突起，从浅绿色或灰白色愈伤组织上，不断分化产生幼芽，每个愈伤组织块产生15～20株，形成簇生幼苗。

（六）生根与移载

将上述无根幼苗切成单芽，接种到生根培养基③上，10 d后生根并长成小植株。待小苗长至5～6 cm时，打开瓶盖，小心取出试管苗洗净根部培养基，移至盛有蛭石、椰糠、菜园土（1∶1∶2）混合基质的营养钵中，并用薄膜覆盖保湿3～5 d，小苗成活率可达90%以上。

五、绞股蓝的组织培养技术

绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum，见图7-31）又名七叶胆、五叶参、七叶参、小苦药等，为被子植物门、双子叶植物纲、葫芦目、葫芦科、绞股蓝属草质攀援植物。绞股蓝主要生长在海拔300～3 200 m的山谷密林、山坡疏林、灌丛或路旁草丛中，主要分布于中国、印度、尼泊尔、孟加拉、斯里兰卡、缅甸、老挝、越南、马来西亚、印度尼西亚、新几内亚、朝鲜和日本，在中国主要分布在陕西、甘肃、湖南、湖北、云南、广西等省。茎细弱，具分枝，具纵棱及槽，无毛或疏被短柔毛；叶膜质或纸质，鸟足状，被短柔毛或无毛；小叶卵状长圆形或披针形；花雌雄异株，雄花圆锥花序，花序轴纤细，多分枝，有时基部具小叶，被短柔毛；花梗丝状，基部具钻状小苞片；雌花圆锥花序远较雄花短小；果实肉质不裂，球形，成熟后黑色，光滑无毛，内含倒垂种子2粒。种子卵状心形，灰褐色或深褐色，顶端钝，基部心形，压扁，两面具乳突状凸起。绞股蓝制成茶对人体有很好的益处，绞股蓝茶取材于绞股蓝叶腋部位的嫩芽和龙须，汤色清澈，长期饮用，无任何毒副作用，还可降血脂、调血压、防止血栓、防止心血管疾患，调节血糖，促睡眠，缓衰老，抗癌，提高免疫力，调节人体生理机能。生长在南方的绞股蓝药用含量比较高，民间称其为神奇的“不老长寿药草”。1986年，国家科委在“星火计划”中，把绞股蓝列为待开发的“名贵中药材”的首位。

图7-31　绞股蓝

（一）外植体选择

取带腋芽茎段作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

取带腋芽嫩枝条，用自来水冲洗干净，先用70%的酒精表面消毒20～30 s，再用0.1%的HgC12溶液消毒8～10 min，用无菌水冲洗4～5次后，将嫩枝条剪成带1个腋芽、长0.5～1.0 cm的茎段为外植体以供接种用。

（三）培养基及温光条件

基本培养基为MS；丛生芽诱导培养基：①MS+6-BA 1.0～1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+ CH（水解乳蛋白）200 mg/L；生根培养基：②MS。

①培养基加蔗糖4%，②培养基加蔗糖1.5%，琼脂0.7%，pH为5.8。培养温度为（25±2）°C，光照时间为10 h/d，光照度为1 500 lx。

（四）分化培养与植株再生

将灭过菌的外植体接种于培养基①中，培养20 d后外植体产生丛生芽，每个外植体产生芽苗数多达10～20个。待芽苗伸长至2 cm左右，将芽苗切成单芽，转入生根培养基②中，10 d左右芽苗开始生根，继续培养15 d后形成生长正常的试管苗，然后进行炼苗移栽。

六、何首乌的组织培养技术

何首乌（Fallopia multiflora，见图7-32）又名多花蓼、紫乌藤、夜交藤等，为被子植物门、双子叶植物纲、蓼目、蓼科、何首乌属多年生缠绕藤本植物。何首乌主要生长在海拔200～3 000 m的生山谷灌丛、山坡林下、沟边石隙，分布在陕西南部、甘肃南部、华东、华中、华南、四川、云南及贵州，日本也有分布。块根肥厚，长椭圆形，黑褐色；茎缠绕，多分枝，具纵棱，无毛，微粗糙，下部木质化；叶卵形或长卵形，顶端渐尖，基部心形或近心形，两面粗糙，边缘全缘，托叶鞘膜质，偏斜，无毛；花序圆锥状，顶生或腋生，分枝开展，具细纵棱，沿棱密被小突起；苞片三角状卵形，具小突起，顶端尖，每苞内具2～4花；花梗细弱，下部具关节，果时延长；花被片椭圆形，大小不相等，外面3片较大背部具翅，果时增大，花被果时外形近圆形；瘦果卵形，具3棱，黑褐色，有光泽，包于宿存花被内。何首乌的块根可入药，是常见的名贵中药材，具有安神、养血、活络、解毒、消痛的功效；何首乌还可以补益精血、乌须发、强筋骨、补肝肾。

图7-32　何首乌

（一）外植体选择

取植株上幼嫩茎尖作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

在3、4月份，取生长健壮的何首乌植株茎尖，用自来冲洗30 min，剪去展开的叶片，剪取0.8 cm大小的芽尖，用无菌水冲洗2次，先用70%的酒精消毒30 s，再转入0.1%的HgC12消毒10 min左右，用无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干表面水分后为外植体以供接种用。

（三）培养基及温光条件

基本培养基为MS；愈伤组织诱导培养基：①1/2MS++2，4-D 0.1～0.3 mg/L；芽分化培养基：②MS+6-BA 1.0 mg/L；生根培养基：③1/2MS+NAA 0.1～0.3 mg/L。

上述培养基均加琼脂0.7%，pH为5.8～6.0，①和②号培养基加蔗糖3%，③号培养基加蔗糖1.5%。培养温度为（25±1）°C，光照时间为12 h/d，光照度为1 500～2 000 lx。

（四）芽的诱导与增殖

将灭过菌的外植体接种到培养基①和②上，接种培养基①的外植体培养6 d后基部切口处形成愈伤组织，为浅褐色，并逐渐向培养基表面发展；接种在培养基②上的外植体基部均膨大，愈伤组织初为绿色结构致密，将愈伤组织切割再转入到新鲜培养基②中，芽分化诱导效果好，丛芽多，并逐渐形成无根苗。待无根苗长至2～5 cm时，可在培养基②中进行增殖培养，15～20 d，芽苗基部叶腋处有侧芽发生，基部切口处形成愈伤组织并进一步分化出不定芽，逐渐形成丛芽，切开丛芽继代培养，25～30 d可继代1次。

（五）生根与移栽

剪取2 cm长的分化芽苗接种于培养基③上，20 d后产生不定根，当苗根长至3～5 cm时，打开瓶盖，室温下炼苗5～7 d，然后取出小苗，置于盛河沙的盆中，温度控制在25～30 °C，空气相对湿度控制在60%～70%，15 d后成活率为80%左右。

七、铁皮石斛的组织培养技术

铁皮石斛（Dendrobium officinale，见图7-33）又名黑节草、云南铁皮、铁皮斗，为被子植物门、单子叶植物纲、微子目、兰科、石斛属多年生附生草本植物。铁皮石斛主要生长在海拔达1 600 m的山地半阴湿的岩石上，主要分布于安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）等地。茎直立，圆柱形；叶二列，纸质，长圆状披针形，先端钝并且多少钩转，基部下延为抱茎的鞘，边缘和中肋常带淡紫色，叶鞘常具紫斑，老时其上缘与茎松离而张开；总状花序常从落了叶的老茎上部发出，具2～3朵花，萼片和花瓣黄绿色，近相似，长圆状披针形，花期3～6月。铁皮石斛具有较高的观赏价值，其茎又可入药，属补益药中的补阴药，具有生津养胃、滋阴清热、润肺益肾、明目强腰的功效。

图7-33　铁皮石斛

（一）外植体选择

取其胚为外植体。

（二）无菌外植体的获得

先取胚龄120 d的幼果，去除宿存花被，用75%的酒精表面灭菌20 s，然后置于10%的次氯酸钠溶液中消毒15 min，用无菌水冲洗4～5次，取其胚为外植体以供接种用。

（三）培养基及温光条件

基本培养基为改良N6（N6培养基中KNO3的含量改为3 000 mg/L，（NH4）2SO4改为200 mg/L，其他成分同N6）；胚培养的培养基：①改良N6+NAA 0.2 mg/L+10%椰乳；壮苗生根培养基：②改良N6+NAA 0.2 mg/L+10%香蕉汁+1%活性炭。

上述培养基均加蔗糖2%，琼脂0.7%，pH为5.8。培养温度为25～28 °C，光照时间为12 h/d，光照度为1 500～2 000 lx。

（四）铁皮石斛胚培养

将灭过菌的胚均匀撒播于培养基①上，一般7～10 d后萌发率为85%～95%，胚萌发后转瓶快繁。培养30 d后芽开始生长，不久形成小植株，大多数小植株无根，即可进行生根培养。

（五）生根与炼苗移栽

将无根苗转入生根培养基②中，根系发育好，苗粗壮。移栽前，先将石斛试管苗在室内开瓶炼苗8～10 d，以增强幼苗对环境的适应能力，并促使根系粗壮发达，然后取出小苗洗净根部培养基植于碎砖块、珍珠岩、碎木炭（4∶1∶1）并加适量园土的混合基质中，浇透水，放入防雨荫棚内（见图7-34）。定根前要控制水分，7 d内不浇水，只要保持叶面及基质湿润即可，以后随着植株生长逐渐增加淋水和曝光程度。

图7-34　铁皮石斛炼苗移栽

八、金线莲的组织培养技术

金线莲（Anoectochilus roxburghii，见图7-35）别名花叶开唇兰、金线风，为被子植物门、单子叶植物纲、微子目、兰科、开唇兰属多年生草本植物。金线莲生于海拔50～1 600 m的常绿阔叶林下或沟谷阴湿处，产于中国、日本、泰国、老挝、越南、印度、不丹、尼泊尔，孟加拉国也有分布。株高8～18 cm；根状茎匍匐，伸长，肉质，具节，节上生根；茎直立，肉质，圆柱形，具2～4枚叶；总状花序具2～6朵花，花白色或淡红色，不倒置（唇瓣位于上方），花瓣质地薄，近镰刀状，花期8～11月。以全草入药，具有清热凉血、解毒消肿、润肺止咳的功效，主要用于治疗咯血、咳嗽痰喘、小便涩痛、消渴、乳糜尿、小儿急惊风，对口疮、心脏病、毒蛇咬伤也有疗效。

（一）外植体选择

取其腋芽、顶芽作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

将金线莲植株洗净后去掉根、叶，再用小刀把叶鞘削掉，整个过程不要伤及腋芽及顶芽。用棉花沾肥皂水擦洗植株后用纱布包起，移至超净工作台上。用75%的酒精表面灭菌15 s，用无菌水冲洗3次，然后置于10%的次氯酸钠溶液中消毒15 min，用无菌水冲洗4～5次，适当修剪，带1～2个腋芽的茎段为外植体以供接种用。

图7-35　金线莲

（三）培养条件及温光条件

基本培养基为MS；芽诱导培养基：①1/2MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA1.0 mg/L；继代培养基：②MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+KT 2.0 mg/L；生根培养基：③1/2MS+NAA 4.0 mg/L。

上述培养基均加蔗糖3%，琼脂0.5%，pH为6。培养温度为（23±2）°C，光照时间为12 h/d，光照度为800～1 200 lx。

（四）芽的诱导与增殖

将灭过菌的带腋芽的茎段接种到培养基①中，15 d后开始萌动，腋芽以丛生生长为主，顶芽以伸长生长为主。30 d后，将诱导出的芽切成带1～2个腋芽的茎段，接到培养基②中进行增殖培养。

（五）生根移栽

将得到的粗壮无根苗接种于③号培养基上，10 d后开始生根，根不从切口处而从靠近培养基的每个节上长出1～2条，呈肉质状。根比较短且不分支，其上有细密、乳白色的根毛，培养50 d左右，植株长至10 cm时可进行室外移栽。栽培基质采用腐殖土、椰糠、细沙（1∶1∶1）。移植前基质进行日晒消毒。空气相对湿度保持在70%～85%。

九、黄精的组织培养技术

黄精（Polygonatum sibiricum，见图7-36）又名鸡头黄精、黄鸡菜、笔管菜、爪子参、老虎姜、鸡爪参，为被子植物门、单子叶植物纲、百合目、百合科、黄精属多年生草本植物。黄精生于海拔800～2 800 m的林下、灌丛或山坡阴处，分布于黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西、陕西、内蒙古、宁夏、甘肃（东部）、河南、山东、安徽（东部）、浙江（西北部），朝鲜、蒙古和俄罗斯西伯利亚东部地区也有分布。根状茎圆柱状，由于结节膨大，因此“节间”一头粗、一头细，在粗的一头有短分枝（中药志称这种根状茎所制成的药材为鸡头黄精），直径1～2 cm；茎高50～90 cm，或可达1 m以上，有时呈攀援状；叶轮生，每轮4～6枚，条状披针形，先端拳卷或弯曲成钩；花序通常具2～4朵花，呈伞形状，俯垂；浆果，黑色，具4～7枚种子。黄精的根茎可入药，具有补脾、润肺生津的作用。黄精是集药用、食用、观赏于一身的植物，市场需求量日益增加，具有良好的经济效益。

图7-36　黄精

（一）外植体的选择

黄精的带芽根茎可作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

将黄精根茎从土中挖出，洗去泥土。用刀切取带芽根茎于洗洁精水溶液中浸泡5 min，然后用自来水冲洗干净；用75%酒精擦洗表面，再用自来水冲洗干净；在超净工作台上，用75%酒精消毒0.5 min，用无菌水冲洗，再用0.1%的HgCl2溶液消毒约8 min，无菌水冲洗4～5 次，用刀切去伤口坏死部分为外植体，以供接种用。

（三）培养条件及温光条件

基本培养基为MS；芽诱导培养基为①MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L；继代培养基为②MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+GA3 0.5 mg/L；生根培养基为③1/2MS+IBA 0.7 mg/L。

上述培养基均加蔗糖3%，琼脂0.5%，pH为5.8。培养温度为（20±2）°C，光照时间为12 h/d，光照度为2 000 lx。

（四）芽的诱导与增殖

将灭过菌的芽接种到培养基①中，45 d后，逐渐形成不定芽。将分化有不定芽的块茎切成直径0.5 cm大小接种于培养基②中进行增殖培养，约45 d后可继代1次，增殖倍数可达10倍。

（五）生根与炼苗移栽

将得到的粗壮无根苗（同带芽根茎）单个切下，接种于③号培养基上，45 d后根均形成，成苗率达80%～90%，并且根色白而粗。将已生根的黄精带芽根茎敞口炼苗3 d，选取根数在4条以上、平均根长1 cm以上的黄精根茎，用自来水冲去琼脂，栽种到基质（珍珠岩与蛭石2∶1混合）中，每隔7 d施用一次营养液，30 d后成活率达到85%以上。

十、丹参的组织培养技术

丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.，见图7-37）又名紫丹参、赤参、血丹参、红丹参，为被子植物门、双子叶植物纲、唇形科、鼠尾草属多年生草本植物。丹参主产于四川、安徽、江苏等省，我国大部分省、自治区均有分布和栽培。株高30～100　cm；根细长，圆柱形，外皮朱红色；茎四棱形，上部分枝；叶对生，单数羽状复叶，小叶3～5片，顶端小叶片较侧生叶片大，小叶片卵圆形；轮伞花序顶生兼腋生，花唇形，蓝紫色，上唇直立，下唇较上唇短；小坚果长圆形，熟时暗棕色或黑色。丹参以干燥的根入药，为常用中药，具有活血化淤、消肿止痛、养血安神的功效，另外还有增强免疫力、保护肾脏等作用。近代医学临床用它来治疗冠心病、心绞痛等，疗效显著，市场前景非常广阔。

图7-37　丹参

（一）外植体选择

取其叶、带芽茎段作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

将丹参健壮叶片或带芽茎段用自来水冲洗2 h，在超净工作台上用75%的酒精浸泡5 s，用无菌水洗1次，用0.1%的HgCl2 常规灭菌6 min，用无菌水冲洗5次。将灭菌好的叶片切成0.5cm×0.5 cm的小块，茎段切成0.5 cm的小段，以供接种用。

（三）培养条件及温光条件

基本培养基为MS；芽诱导培养基为①MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L；继代培养基为②MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；生根培养基为③MS+NAA 0.5 mg/L。

上述培养基均加蔗糖3%，琼脂0.5%，pH为5.8。培养温度为（23±2）°C，光照时间为12 h/d，光照度为2 000～3 000 lx。

（四）芽的诱导与增殖

将灭过菌的叶片或带腋芽的茎段接种到培养基①中，20 d后整个切段开始生成愈伤组织，30 d左右形成丛生芽，有些是直接受到激素诱导形成丛生芽。待芽体长到一定高度后，将其切断转接到培养基②中进行增殖培养。

（五）生根移栽

将得到的无根苗接种于③号培养基上，15 d后开始生根。丹参试管苗生根比较容易，约40 d，便可见苗底部生长出细长白色的根，为5～8条。

十一、白芨的组织培养技术

白芨（Bletilla striata，见图7-38）又名连及草、甘根、白给、箬兰、朱兰、紫兰、紫蕙、百笠，为被子植物门、单子叶植物纲、微子目、兰科、白芨属多年生草本植物。白芨原产中国，广布于长江流域各省，日本、缅甸北部也均有分布。株高18～60 cm；叶4～6枚，狭长圆形或披针形，先端渐尖，基部收狭成鞘并抱茎；花序具3～10朵花，常不分枝或极罕分枝，花大，紫红色或粉红色，也有变种白花白芨，花白色，园艺品种还有蓝、黄、粉红等色；种子极细小，似粉末状，无胚乳。白芨具有广泛的药用价值及园林价值，主要用于收敛止血，消肿生肌；花有多色，可盆栽室内观赏，也可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。

图7-38　白芨

（一）外植体选择

取其侧芽作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

将白芨带侧芽茎段用洗衣粉溶液浸泡20 min，然后用自来水冲洗干净，在超净工作台上用75%的酒精浸泡10 s，用无菌水洗1次，用0.1%的HgCl2 常规灭菌8 min，用无菌水冲洗5次。将灭菌好的侧芽从茎上切下以供接种用。

（三）培养条件及温光条件

基本培养基为MS；芽诱导培养基为①MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L；继代培养基为②MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L；生根培养基为③1/2MS+NAA1.0mg/L。

上述培养基均加蔗糖3%，琼脂0.5%，pH为5.8。培养温度为（23±2）°C，光照时间为12 h/d，光照度为2 000～3 000 lx。

（四）芽的诱导与增殖

将灭过菌的侧芽接种到培养基①中，30 d后诱导出丛生芽，诱导率可达90%以上。当诱导丛生芽长到1～2 cm时，将其切分成单芽，接种到培养基②中进行增殖培养，15 d后在节间处出现一个个小突起，30 d后长成丛生芽，增殖系数可达5倍。

（五）生根与炼苗移栽

将无根白芨苗转接到③号培养基上，40 d后全部生根。当白芨组培苗在生根培养基上长有3条以上根时，将瓶苗置于室内炼苗5 d，再打开瓶盖继续炼苗2 d，然后将小苗从增养瓶中取出，洗净黏附在根部的培养基，假植到沙床中3个月，再移栽到大田，成活率达88%。

十二、山葵的组织培养技术

山葵（Wasabia japonica，见图7-39）别名山萮菜、瓦莎荜、泽山葵、溪山葵，为被子植物门、双子叶植物纲、十字花科、山嵛菜属多年生草本植物。山葵主要分布于中国和日本，是一种生长于海拔1 300～2 500 m高寒山区林荫下的珍稀辛香植物。株高20～50 cm；须根系；叶丛生，圆心形，叶缘有波状锯齿；地下茎肥呈圆锥状，淡绿色，有辛辣味，研磨后味更浓烈；总状花序顶生或腋生，花瓣白色；长角果；种子绿色，形同萝卜种子。山葵是一种经济价值很高的蔬菜兼药用植物，全株可入药，具有强烈的香辛、辣味，是日本吃生鱼片、海鲜类的高级调味品，被人们誉为“绿色黄金”。山葵根茎可以制成山葵酱等佐料，叶柄可制成别有风味的腌酱菜，叶子可以用来煮汤、油炸或清炒，不但口感好，还具有杀菌、预防肿瘤等多种药理作用，其成分及功能一直备受人们关注。由于其适宜生长的条件很特殊，所以价格昂贵。

图7-39　山葵

（一）外植体选择

取其胚轴、真叶柄作为外植体。

（二）无菌外植体的获得

将山葵胚轴、真叶柄小心取下，用自来水冲洗1 h，在超净工作台上用75%的酒精浸泡3 s，用无菌水洗1次，用0.1%的HgCl2常规灭菌5 min，然后用无菌水冲洗5次，再用无菌滤纸吸干材料表面的水分，以供接种用。

（三）培养条件及温光条件

基本培养基为MS；芽诱导培养基为①MS+6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 2.0 mg/L；继代培养基为②MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L；生根培养基为③1/2MS+NAA 1.0 mg/L。

上述培养基均加蔗糖3%，琼脂0.5%，pH为6。培养温度为（20±1）°C，光照时间为12 h/d，光照度为1 800～2 000 lx。

（四）芽的诱导与增殖

将灭过菌的胚轴或真叶柄接种到培养基①中，4 d后，材料出现膨大，随后膨大明显并胀裂表皮，接着从表皮的内层细胞长出浅黄色愈伤组织。25 d后愈伤组织完全形成。将愈伤组织接种到培养基②中进行增殖培养，30 d后从愈伤组织中长出小芽。

（五）生根与炼苗移栽

将无根山葵苗转接到③号培养基上，25 d后开始生根。当组培苗在生根培养基上长有3条以上根时，将瓶苗置于室内炼苗7 d，再打开瓶盖继续炼苗2 d，然后将小苗从培养瓶中取出，洗净黏附在根部的培养基，假植到苗床中。栽培基质用复合肥和硼砂与土拌匀即可移栽。