栽培种的制作

为了使分离培养的母种适应栽培环境和扩大菌种数量，以满足生产的需求，必须将其移植驯化和扩繁，即将母种繁殖成原种，再制成栽培种。

一、原种的制作

1．培养基配方与制备方法

生产中经常采用下列配方。

①大米700克，玉米渣300克，葡萄糖5克，蛋白胨5克，蚕蛹粉10克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0．5克，VB1少许。

②大米1000克，葡萄糖10克，蛋白胨10克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0．5克。

③家蚕蛹99克，葡萄糖1克。

选择上述任一种配方，首先将可溶性物质溶解于水中制成营养液，然后在每个罐头瓶中加入大米30～32克，加入营养液30～35毫升，用聚丙烯薄膜封口，然后进行灭菌。高压蒸汽灭菌的温度为121℃～126℃，持续时间40～60分钟;常压灭菌保持温度100℃，时间6～8小时。

2．接种与培养

灭菌之后，将培养基移入无菌室或接种箱内冷却至25℃以下，进行接种。接种前，操作人员应做好接种室(箱)、器具和工作服及手的消毒处理。在酒精灯火焰旁，拔去试管菌种棉塞，并使试管口对准火焰，接种钩在酒精火焰上灼烧之后放在试管口处冷却，打开装培养基瓶的瓶口，将一块蚕豆粒大小的菌种块迅速移入瓶内，再按原样封好瓶口，并摇动菌种块使其在培养基的料面均匀地滚过，使菌丝分散在培养基表面，以增加发菌面积。一般每支斜面菌种可接原种4～6瓶。

接种后应及时将菌种瓶移至培养室内的培养架上，贴上标签，注明菌种名称与接种时间，室内应保持黑暗，温度控制在18℃～22℃。空气相对湿度要求60%～70%，培养时间需15～20天，待菌丝长满之后，给予散色光光照，略有转色，即培养完成，此为原种。

另外，在培养的过程中要定期(第3天、第5天、第7天)进行检查，若发现杂菌污染，即瓶内长有红、褐、黑、绿等颜色的菌落或出现异味、积水时，应及时淘汰，并进行消毒处理。

二、栽培种的制作

固体栽培种的制作与原种的制作方法基本相同，只是用原种进行接种，一瓶原种可以接20～30瓶栽培种。