细胞因子相关性研究

细胞因子相关性研究_责任与使命——宁夏博士研究成果集萃

原发性支气管肺癌中医证型与免疫指标、细胞因子相关性研究

马　科　马立凤　施志明

宁夏医科大学中医学院中医内科教研室；银川市第一人民医院内科；

上海中医药大学附属龙华医院肿瘤三科

摘　要:目的探讨原发性支气管肺癌患者各证型与免疫指标、细胞因子之间有何关系；进一步探寻原发性支气管肺癌患者各证型的在微观辨证上具有指导意义的相关指标，以期建立其宏观辨证和微观辨证体系。方法对93例确诊的肺癌患者应用流式细胞仪、酶联反应法及ELISA方法检测免疫指标和细胞因子，并运用方差分析探讨免疫指标、细胞因子与各证型之间的相关性。结果在痰湿蕴肺肺失宣降证型中CD3其值偏高（P＜0.05）；在肺阴亏虚阴虚内热证型中CD62P其值偏低（P＜0.05）；在肺脾气虚运化失司证型中IL-2、CD3均偏低（P＜0.05），VEGF增高趋势明显；在肾阳虚衰肾不纳气证型中CD62P其值偏高（P＜0.05），VEGF增高趋势明显，在气血亏虚运化失司证型中CD3和CD4其值偏低（P＜0.05）。结论据这些微观指标以及结合临床经验可初步得出原发性支气管肺癌其证型由轻至重的演变大致趋势是:痰湿蕴肺肺失宣降→肺阴亏虚阴虚内热→气血亏虚阴阳失衡→肺脾气虚运化失司→肾阳虚衰肾不纳气。提示肺癌发病早期就易出现化热或热象而伤及机体气血津液；中期则由于癌变的耗气伤津易造成机体气血阴阳失去平衡；后期由于癌变的进一步内侵则出现肺脾同病、肺肾同病的脏腑病变。

关键词:原发性支气管肺癌　中医证型　免疫指标　细胞分子　相关性

Study on relativity between Syndrome differentiation rules of Traditional Chinese medicine of Primary bronchogenic carcinoma and Immunity index Cytokine

Abstract: Objective: Discuss the relativity of Primary bronchogenic carcinoma and Immunity index and Cytokine. further to realize the relation about immunity targets and cytokine in vary typing of Primary bronchogenic carcinoma, try to establish Macrocosmic syndrome differentiation of typing of Syndrome of Traditional Chinese medicine of Primary bronchogenic carcinoma and to know meaning of immunity targets and cytokine in Microcosmic syndrome differentiation.Methods: Immunity index and cytokine of 93 confirmed cases were tested by flow cytometry, Enzymoimmunoassay, and ELISA. To disguss the relativity between Syndrome differentiation rules with TCM and Immunity index and Cytokine on Primary bronchogenic carcinoma by One-Way Analysis of Variance.Results: The CD3 is significantly on the high side in the typing of phlegm dampness accumulate in lung （P＜0.05） ;the CD62P is significantly on the low side in the typing of deficiency of the lung yin and in the typing of deficiency of yin and internal heat （P＜0.05） ;the both of IL-2 and CD3 is on the low side and in the typing of deficiency of the lung-qi and spleen-qi （P＜0.05） ,the VEGF is also on the high side but no statistical meaning （P＞0.05） ; the CD62P is on the low side in the typing of kidney yang deficiency （P＜0.05） , the VEGF is also on the high side but no statistical meaningand the NK is on the low side but no statistical meaning （P＞0.05） ;both of CD3 and CD4 is on the low side in the typing of deficiency of qi and blood （P＜0.05） .Conclusion: The tendency on evolvement in Syndrome differentiation rules of Traditional Chinese medicine of Primary bronchogenic carcinoma can be concluded that :the typing of phlegm dampness accumulate in lung→the typing of deficiency of the lung yin and in the typing of deficiency of yin and internal heat→the typing of deficiency of qi and blood→the typing of deficiency of the lung-qi and spleen-qi→the typing of kidney yang deficiency.

Keywords: Primary bronchogenic carcinoma； Syndrome differentiation rules of Traditional Chinese Medicine；Immunity index；Cytokine；relativity

随着证候本质研究的深入和微观辨证的需求，近年来有关肺癌证型的物质基础研究已有所涉足。传统中医的诊治体系的理论依据和思维方式是以外测内，从而缺少从微观层次上辨证。因此，完善中医辨证体系纳入微观辨证是中医药学迫切需要解决的重大课题，本课题就原发性支气管肺癌患者各证型的物质基础相关性进行了探索性的研究。现将研究结果报告如下:

1　研究对象与方法

1.1　病例选择

全部病例来源于2004年8月至2005年12月上海中医药大学附属龙华医院肿瘤三科住院病人。其中男性64例、女性29例，男∶女＝2.21∶1，最大年龄是85岁，最小年龄是45岁，平均年龄为63.33±10.93岁。

1.2　诊断辨证标准

1.2.1　诊断标准

按《中药新药临床研究指导原则》^[1]所制定的原发性支气管肺癌诊断标准进行临床诊断。

1.2.2　分期标准

肺癌TNM分期系统采用UICC，5thed.1997所制定的新的分期系统。

1.2.3　中医辨证诊断标准

采用作者博士课题研究所得结果^[2]，分为:痰湿蕴肺肺失宣降、肺阴亏虚阴虚内热、气血亏虚阴阳失衡、肾阳虚衰肾不纳气、肺脾气虚运化失司五型。

1.2.4　病例纳入标准

（1）经细胞学或病理学证实为原发性肺癌鳞癌、腺癌或大细胞癌、小细胞癌以及其他细胞类型，且符合中医辨证的Ⅰ－Ⅳ期患者； （2）不能手术的肺癌患者（包括经手术探查，未切除癌肿患者）； （3）经手术原发病灶已切除但又出现复发者； （4）经化疗或放疗以及其他方式治疗的患者； （5）任何年龄段的患者； （6）具有良好依存性的患者。

1.2.5　排除标准

（1）有心、肝、肾等严重疾病患者，及其功能严重障碍者，精神病患者；（2）继发的肺癌患者； （3）对多种药物过敏及属于过敏体质的患者。

1.3　研究内容及主要方法

1.3.1　辨证分型

进入本研究符合诊断有效病例共93例，其中:痰湿蕴肺肺失宣降20例；肺阴亏虚阴虚内热27例；气血亏虚阴阳失衡21例；肾阳虚衰肾不纳气11例；肺脾气虚运化失司14例。

1.3.2　免疫指标和细胞因子检测方法

1.3.2.1　外周血T淋巴细胞亚群数量的测定

用流式细胞仪（BD公司）进行检测CD3、CD4、CD8细胞亚群的百分率测定。

1.3.2.2　IL-2活性测定

采用酶联反应法进行检测:计算标本中IL-2浓度单位（Pg/ML）。药盒由深圳晶美公司提供进口分装试剂盒，按说明书操作。测量仪器是雷勃公司生产的wellscan 2000型酶标仪。

1.3.2.3　血清VEGF的测定采用ELISA方法检测

1.3.2.4　血浆CD62P的测定采用流式细胞术检测

1.4　统计分析方法

采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）进行统计分析。方差齐时用LSD法，方差不齐时用Tambane’ s T2法。用SPSS11.0软件包进行统计学分析。数据以表示。

2　结果

2.1　IL-2与各证型之间的关系

表1　各证型中IL- 2值比较（x±s）

▲与肺脾气虚运化失司证型比较P＜0.05。

表1显示IL-2在气血亏虚阴阳失衡证型中其均值明显偏高，在肺脾气虚运化失司证型中明显偏低，二者相比较有显著性统计学意义。

2.2　CD3、CD4、CD8、CD4/CD8与各证型之间的关系

表2　各证型CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、N值比较（x±s）

△与肺脾气虚运化失司证型比较P＜0.05；▲与痰湿蕴肺肺失宣降证型比较P＜0.05；

※与肺阴亏虚阴虚内热证型比较P＜0.05；★与痰湿蕴肺肺失宣降证型比较P＜0.05。

表2显示在痰湿蕴肺肺失宣降证型中CD3均值偏高，在气血亏虚阴阳失衡证型和肺脾气虚运化失司证型中其值明显降低，与痰湿蕴肺肺失宣降比较有显著性统计学意义；在气血亏虚阴阳失衡证型中CD4均值偏低，与肺阴亏虚阴虚内热证型比较有显著性统计学意义；在肺脾气虚运化失司证型中其CD8均值偏低，与痰湿蕴肺肺失宣降证型比较有显著性统计学意义。

2.3　CD62P与各证型之间的关系

表3　各证型CD62P值比较（x±s）

▲与肺阴亏虚阴虚内热证型比较P＜0.05 。

表3显示在肾阳虚衰肾不纳气证型中CD62P均值偏高，与肺阴亏虚阴虚内热证型比较有显著性统计学意义。

2.4　VEGF与各证型之间的关系

表4　各证型VEGF值比较（x±s）

注:VEGF在各证型之间无明显统计学差异（P>0.05）。

表4显示各证型VEGF没有明显的统计学差异，显示VEGF在原发性支气管肺癌各证型中呈增高的趋势，尤其在肾阳虚衰肾不纳气证型和肺脾气虚运化失司证型中增高明显。

3　结论与分析

通过以上统计学单因素分析结果，表明以上各指标中IL-2、CD3、CD4、CD8和CD62P与各证型之间有一定的相关性，而CD4/CD8、VEGF三指标在本组研究资料中未见明显的统计学差异，具体相关性如下:

IL-2在气血亏虚阴阳失衡证型中其均值偏高，在肺脾气虚运化失司证型中其均值偏低，二者相比较有显著性统计学意义；CD3在痰湿蕴肺肺失宣降证型中其均值偏高，在气血亏虚阴阳失衡证型和肺脾气虚运化失司证型中其均值均偏低，这两型与痰湿蕴肺肺失宣降证型相比均有显著统计学意义（P＜0.05）；CD4在气血亏虚阴阳失衡证型中其均值偏低，与肺阴亏虚阴虚内热证型比较有显著性统计学意义（P＜0.05）；CD8在肺脾气虚运化失司证型中其均值偏低，与痰湿蕴肺肺失宣降证型比较有显著性统计学意义（P＜0.05）；CD62P在肾阳虚衰肾不纳气证型中其值偏高，与肺阴亏虚阴虚内热证型比较有显著性统计学意义（P＜0.05）；而CD4/CD8、VEGF经各证型两两比较显示没有明显的统计学差异，但是VEGF在各证型中呈增大趋势，尤其在肺脾气虚运化失司证型和肾阳虚衰肾不纳气证型中明显增高。

依据以上各指标在各证型中的相对特异性的变化从而可以初步界定在临床上原发性支气管肺癌患者各中医证型与这些微观指标之间的相关性:

在痰湿蕴肺肺失宣降证型中:CD3其值偏高；

在肺阴亏虚阴虚内热证型中:CD62P其值偏低；

在肺脾气虚运化失司证型中:IL-2、CD3均偏低，VEGF增高趋势明显；

在肾阳虚衰肾不纳气证型中:CD62P其值偏高，VEGF增高趋势明显；

在气血亏虚运化失司证型中:CD3和CD4其值偏低；

结合各证型和各指标的临床意义进一步分析表明:在痰湿蕴肺肺失宣降证型中CD3偏高，说明病变尚处在整个病程的早期阶段，为致癌病变的各种病邪作用于机体，刺激机体相应的免疫功能使之激活进行的机体自我保护情况。从而提示此证型为肺癌病变中正邪交争剧烈，机体自我防卫能力有所加强，以实证为主要矛盾。

在肺阴亏虚阴虚内热证型中CD62P其值偏低，提示该证型主要是致癌邪气作用于机体易伤津化热。

在气血亏虚运化失司证型中:CD3和CD4其值均偏低，提示癌病变的过程中机体免疫功能状态低下，多为疾病的中后期阶段，正气亏虚，无力抗拒外邪而致。

在肺脾气虚运化失司证型中:IL-2、CD3均偏低。IL-2抗肿瘤的生物活性主要有:促进自然杀伤细胞（NK）的增值，增强NK细胞的杀伤活性；诱导产生淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK），LAK具有广泛的抗肿瘤活性；促进T淋巴细胞的增值；促进巨嗜细胞分泌IFN以杀伤肿瘤细胞^[3]。由此，说明在肺脾气虚运化失司证型中患者机体免疫力低下，而肿瘤生长的因素加强，为病进预后不好。

在肾阳虚衰肾不纳气证型中:CD62P其值偏高，提示容易出现机体的血流的改变。P－选择素（P-selectin,Ps）属于细胞粘附分子中的选择素家族，又名GMP-140、CD62P，是一种富含半胱氨酸、高度糖化的整合蛋白。分子骨架由一条多肽链构成的跨膜糖蛋白，分子量为140Kda。分子生物学研究证实，人体内存在两种变构形式，其中一种为血小板表面的CD62P，它存在血小板α颗粒膜上；另一种是血浆可溶性的CD62P形式，它来源于血小板α颗粒和血管内皮细胞的weibel-palade小体中，当血小板活化和内皮细胞受损时，CD62P就释放入血。通过其配体PSG-1介导血小板粘附于内皮细胞及血小板－中性粒细胞、血小板－单核细胞连接，从而产生中性粒细胞激活、血管活性物质、氧代谢产物释放、FIB沉积等多种生物学效应，启动血栓形成过程^[4]。

近年来国内学者开展了CD62P与肿瘤转移的关系，多数学者研究表明CD62P表达增高，是机体肿瘤因素刺激血小板活性增强而致，CD62P表达增高可致体内止血凝血功能失常，从而引起血栓的形成，促进肿瘤的进一步转移^[5～9]。

目前的研究认为，无论是原发肿瘤还是继发转移瘤在生长扩散过程中都依赖血管生成。有大量证据表明肿瘤的生长和扩散转移与血管生成密切相关。肿瘤本身能诱导血管的形成，肿瘤细胞可释放血管生成因子刺激血管内皮细胞生长和移行。此外，肿瘤细胞周边的一些细胞也可能接受某些信号传递，分泌某些生长因子促进肿瘤毛细血管生成。肿瘤细胞和宿主的内皮细胞﹑上皮细胞﹑间皮细胞及白细胞可分泌释放多种活性因子，诱导肿瘤血管生成。在这些活性因子中，VEGF是非常重要的一个细胞因子。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是一种特异性促使血管内皮细胞增殖的有丝分裂原,它是由多种亚型组成的多家族蛋白质,分子量为34-42KD,有研究发现在部分实体肿瘤中它由瘤细胞产生并分泌^[10～11],作用于表达其受体的内皮细胞,从而诱导新血管生成,在肿瘤的生长、发展和转移过程中起着重要作用。VEGF通过与VEGF受体结合，引起一系列的信号传导，释放各种生长因子和细胞因子，促进内皮细胞的增殖与迁移，最终引起血管的增殖。调节VEGF的分泌释放是目前研究的热点之一，目的在于通过阻断肿瘤细胞分泌VEGF来达到抗转移的效果，并已进入了临床研究阶段^[12～13]。本课题在最初的多因素研究中提示VEGF与各证型之间有一定的相关性，但通过进一步的单因素分析发现VEGF与各证型之间未有明显的统计学差异，但在各证型中其值呈现增高趋势，尤其在肾阳虚衰肾不纳气以及肺脾气虚运化失司证型中增高明显。因此这方面的研究有待于以后进一步的深入探讨。

因此，根据这些微观指标以及结合临床经验可初步得到在原发性支气管肺癌患者其病情由轻至重的证型演变大致规律是:痰湿蕴肺肺失宣降→肺阴亏虚阴虚内热→气血亏虚阴阳失衡→肺脾气虚运化失司→肾阳虚衰肾不纳气。提示肺癌发病早期就易出现化热或热相而伤及机体气血津液；中期则由于癌变的耗气伤津易造成机体气血阴阳失去平衡；后期由于癌变的进一步内侵则出现肺脾同病、肺肾同病的脏腑病变。

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