槐花米中芸香苷和槲皮素的提取

实验三十七　槐花米中芸香苷和槲皮素的提取

一、实验目的

1．学习从槐花米中提取芸香苷的原理和方法。

2．学习芸香苷水解为槲皮素的制取方法

3．进一步掌握旋转蒸发器的操作技能。

二、基本原理

槐花米是豆科植物槐花的花蕾，自古用作止血药物，治疗吐血、鼻血、子宫出血、痔等出血症疾病。槐花米中主要有效成分为芸香苷，含量可达l5%左右。芸香苷（Rutioside），又名芦丁（Rutin）。分子式为：

芸香苷为淡黄色小针状结晶，熔点为l74℃～178℃。溶解度：冷水1∶8000；热水1∶200；冷乙醇1∶300；热乙醇1∶80。难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。

芸香苷用稀硫酸水解可得粗品槲皮素，再用50%乙醇重结晶可得槲皮素结晶。

槲皮素（Quercetin）分子式为：

槲皮素为黄色结晶，熔点为316℃、313℃～314℃（含2分子结晶水），又称为芸香苷的苷元。溶解度：冷乙醇1∶650，热乙醇1∶30。可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮，不溶于石油醚、乙醚、氯仿与水中。

本实验采用两种方法提取芸香苷：醇提取法与碱提取法。前一种方法是利用芸香苷溶于乙醇的特点，用萃取方法进行提取，再利用它在冷、热水中溶解度的差异，进行重结晶。碱提取方法是利用芸香苷分子中酚羟基的酸性特点，可溶于碱性水溶液，故可用碱性水提取，再向碱性提取液中加入酸进行提取。

醇提取法是用70%乙醇回流提取药材槐花米，浓缩提取液凝析沉淀，抽滤洗涤得芸香苷粗品。用水对粗品进行重结晶得芸香苷精品，再用稀硫酸水解芸香苷得槲皮素粗品，精制后得槲皮素精品。

碱提取法是用碱液煮沸提取药材槐花米，提取液酸析得芸香苷粗品，再用水重结晶得芸香苷精品。用稀硫酸水解得槲皮素粗品，精制后得槲皮素精品。

用聚酰胺层析鉴定芸香苷和槲皮素，用纸色谱鉴定糖。也可采用紫外吸收光谱鉴定芸香苷和槲皮素。

三、仪器和试剂

1．仪器

500mL、250mL圆底烧瓶　　　球形冷凝管

旋转蒸发器　　　　　　　　 抽滤装置

紫外吸收光谱仪　　　　　　 熔点测定管

2．试剂

槐花米　　　　95%、75%、50%乙醇

石油醚　　　　丙酮

2%硫酸　　　　石灰乳

浓盐酸　　　　氢氧化钡

葡萄糖　　　　鼠李糖

四、实验步骤

1．醇提取法

（1）芸香苷粗品的制备

称取40g槐花米置于500 mL圆底烧杯中，用75%乙醇200mL加热回流提取l小时。滤渣再加75%乙醇200 mL加热回流1小时，合并2次提取液，减压浓缩至80 mL，放置24小时，抽滤，滤饼用石油醚、丙酮、95%乙醇各25 mL依次洗涤，得黄色芸香苷粗品，干燥，称取质量。

（2）芸香苷精品的制备

将芸香苷粗品在800mL烧杯中，用400mL去离子水加热溶解，趁热过滤，滤液放置12小时，抽滤，所得结晶干燥，测定熔点，称取质量，计算产率。

（3）槲皮素的制备

称取芸香苷精品2g，在250mL圆底烧瓶中加入2%硫酸150mL，加热回流l小时，用砂芯漏斗抽滤，滤饼用30mL水洗涤2次，得粗品槲皮素。倒出滤液，留待测定糖的种类。用50%乙醇150mL加热溶解，趁热过滤，滤液放置12小时，抽滤，干燥得黄色槲皮素精品，测定熔点，称取质量，计算产率。

2．碱提取法^[1]

（1）芸香苷粗品的制备

称取40g槐花米置于500mL圆底烧杯中，加0.4%硼砂水溶液300mL^[2]，在不断搅拌下加入石灰乳调节pH为8～9^[3]，加热微沸30分钟，不断补充蒸发掉的水分，以保持pH为8～9，趁热抽滤，残渣同上述再重复提取1次。合并2次提取液，水浴加热至90℃，加盐酸调pH4～5，搅匀，放置过夜^[4]，抽滤，用200mL水，分2次洗涤滤饼至中性。60℃干燥滤饼得黄色片状芸香苷粗品。

（2）芸香苷精品的制备

制法同“醇提取法”中“芸香苷精品的制备”。

（3）槲皮素的制备

制法同“醇提取法”中“槲皮素的制备”。

五、糖、芸香苷、槲皮素的鉴定

1．糖的鉴定

样品：取槲皮素制备中的滤液20mL，用饱和的Ba(OH)₂溶液中和至pH为7，滤去沉淀，滤液浓缩至1～2 mL，得样品A。

对照样品：葡萄糖标准样品B；鼠李糖标准样品C。

层析滤纸：新华1号滤纸。

展开剂：正丁醇-乙酸-水（体积比为4∶1∶5）。

显色剂：苯胺-邻苯二甲酸。

显色：105℃烘干10分钟，显棕红色或棕色斑点。

2．芸香苷、槲皮素的紫外光谱鉴定

在紫外吸收光谱仪上测试芸香苷、槲皮素的紫外吸收光谱，与标准化合物的吸收光谱进行对照，或利用文献所记载的紫外可见光标准图谱进行核对。

思考题

1．比较醇提取法与碱提取法的异同点。

2．两种提取法是依据芸香苷的哪些性质？

注　解

[1]醇提取法的产率和纯度比碱提取法的产率和纯度高。

[2]硼砂的作用，既能调节水溶液的pH值，又能保护芸香苷减少氧化。

[3]加入石灰乳的目的，既可以达到碱溶解芸香苷的目的，又可以除去槐花米中含有的大量多糖黏液质。

[4]pH值过低会使芸香苷形成锌盐而增加水溶性。