【摘要】：为了得到精确的物理图谱，首先在工作之前对限制酶进行选择是必需的，最好选用那些在DNA链上的切点在20个左右的酶。还要避免选择产生双重带的限制性内切核酸酶。正常情况下，凝胶上的DNA片段的染色强度随相对分子质量减小而递减。其次，DNA分子大小与物理图谱的精确度也有密切关系。
限制性作图_分子生物学实验指
第二节 限制性作图
标明限制性内切核酸酶在DNA分子上的限制位点数目、限制片段大小及其排列顺序的图谱称为DNA的物理图谱，又称限制性作图。组建物理图谱是基因工程研究的重要程序，基因的定位、转录、消化、分离、分子杂交、克隆转化都与物理图谱有直接关系，所以组建物理图谱具有重要意义。
为了得到精确的物理图谱，首先在工作之前对限制酶进行选择是必需的，最好选用那些在DNA链上的切点在20个左右的酶。切点愈多，情况愈复杂，误差也就愈大。还要避免选择产生双重带的限制性内切核酸酶。所谓双重带，即两个片段的大小正好相同，电泳时，它们必然位于同一带位。可以通过染色强度判断双重带。正常情况下，凝胶上的DNA片段的染色强度随相对分子质量减小而递减。如果某个低分子量带的颜色强度反常地高于上带，经荧光比色，其浓度比单一带高出一倍，此即为双重带。其次，DNA分子大小与物理图谱的精确度也有密切关系。太大的DNA(如染色体DNA)难以得到精确的物理图谱。第三，由于几种方法都是以DNA片段大小为基础的，所以在电泳后，要尽可能准确地测定各片段的相对分子量。为了不遗漏小片段(1kb以下的片段在0.7%琼脂糖凝胶上难以观察到)，最好能同时进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。即使如此，精确度也总是有限的，有时可产生100～200bp的误差。
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