果蝇培养基制作全过程

四、实验内容和步骤

(一)果蝇性状识别和性别鉴定

1．性状的识别

遗传实验所常用的性状主要有体色、眼色，刚毛形状和翅形。现把这些性状的一些突变品系列表(表1－1)如下:

表1－1　实验中使用的果蝇突变品系

(接上表)

2．雌雄果蝇的鉴定和比较

果蝇的雌雄在幼虫期较难区别。但到了成虫期却相当容易。成虫雌雄的主要区别在于:

(1)大小:雄性个性一般较雌性小。

(2)腹部环纹:雄性腹部黑色环纹五条，腹尖颜色深，带纹由前向后依次变宽;而雌性腹部环纹七条，环纹宽窄均匀，腹尖色浅(图1－1)。

(3)性梳:雄性第一对足的跗节基部外侧有黑色鬃毛状性梳(sex combs)(图1－2)，雌性则无。

图1－1　雌雄黑腹果蝇外形图

图1－2　雄性果蝇的性梳

3．果蝇麻醉

检查果蝇或进行果蝇杂交时，应先进行麻醉，使其保持安静状态。果蝇具有以下一些特性:一是具有趋光性，二是喜欢向上爬。掌握了这些特性，我们就能很方便地将果蝇转移到另外一个培养瓶中。麻醉时，先将果蝇放入一个空瓶，用滴有数滴乙醚的棉塞塞住瓶口，平放在桌面上约半分钟，果蝇即被麻醉(图1－3)。注意不能麻醉过度，如果果蝇的翅膀与身体呈45度角翘起，表明麻醉过度，不能复苏而死亡。麻醉后的果蝇放在滤纸上方便观察。检查后的果蝇可以放回原培养瓶中，也可以进行处死。

a.将乙醚滴在棉塞上　b．果蝇转至空瓶中　c．盖上有乙醚的棉塞

图1－3　麻醉果蝇的操作方法

4．利用解剖镜观察雌雄果蝇的性状。

(二)果蝇的生活史

1．果蝇的生活史

果蝇的生活史包括卵、幼虫、蛹、成虫四个连续的发育阶段(图1－4)。

卵:白色，椭圆形，长约0．5mm，在背面的前端伸出一对触丝，它能使卵附着在柔软的食物上，不至于深陷到食物中去(图1－5b)。

幼虫:幼虫从卵中孵化出来后，经过两次蜕皮到第三龄期，体长可达4～5mm。在解剖镜下观察可见一端稍尖为头部，并且有一黑点即口器;稍后有一对半透明的唾腺，每条唾腺前有一条唾腺管向前延伸，然后会合成一条导管通向消化道。神经节位于消化道前端的上方(图1－5c)。

1．卵　2．一龄幼虫　3．二龄幼虫　4．三龄幼虫　5．蛹　6．成虫

图1－4　果蝇的生活周期

蛹:幼虫生活七天左右即化蛹，化蛹前从培养基中爬出附在瓶壁上，渐次形成一个菱形的蛹。起初颜色淡黄、柔软，以后逐渐硬化，变为深褐色，这就显示其即将羽化了(图1－5d)。

图1－5　果蝇成虫(a)、卵(b)、幼虫(c)、蛹(d)

成虫:刚羽化出的果蝇，身体狭长，翅还没有展开，身体较白嫩，此时野生型体色与黑檀体体色都是一样的，没有多大区别。不久，蝇体变为粗短椭圆形，双翅展开，体色加深，野生型果蝇的体色成为灰褐色，突变型黑檀体果蝇的体色成为乌黑色(图1－5a)。

果蝇的生活周期与温度关系极大，一般来说温度低，生活周期长;温度高，生活周期短(表1－2)。但温度过高会引起突变、不育，再高则引起死亡。低温能使生活周期延长、生活力下降，过低则会引起死亡。一般实验果蝇培养的最适温度20℃～25℃，原种保存的温度一般为17℃～20℃。

表1－2　生活周期长短与饲养温度关系

2．饲养管理

果蝇一般饲养在奶瓶，或大、中型指管中。培养瓶用前要消毒，然后再倒入1～2厘米厚的饲料(培养基)，待饲料冷却后，用酒精棉花擦去瓶内壁的凝结水，或用棉花球塞塞口后放置数天让其自然干燥后再用。果蝇培养基有多种，实验室通常采用玉米粉培养基，配方如下。

玉米粉培养基:

1)取75ml水、加入1．5g琼脂，13g蔗糖，煮沸使充分溶解。

2)另取75ml水，加入17g玉米粉搅匀，加热调成糊状。

3)将上述两者混合、煮沸。

4)待稍冷后加入1．4g酵母粉及1ml丙酸，充分调匀。

5)趁热将培养基分装入奶瓶、或指管中。

一般每瓶放入5～10对果蝇，2～4周换一次培养基。培养瓶的标签上应写明果蝇品系，培养的日期。培养时避免日光直射。培养时不认真管理，培养基就会发霉。发霉原因很多:如棉塞及器皿没有灭菌，空气污染，亲本不及时倒掉等都会引起发霉。发现发霉要及时处理。少量霉点可用烧过的解剖针挑出，大量霉菌污染，可把果蝇全部倒在一个带有培养基的空指管中2～3h，再换入一个带有培养基的空指管1～2h。然后倒入装有新培养基的培养瓶中继续培养。