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显微镜吸收光度术

时间:2023-02-10 理论教育 版权反馈
【摘要】:显微镜吸收光度术通过测定样品的透光度测定样品化学成分的技术。所以通过测量透光度,再转换为吸光率就可推算出样品的化学成分。由于细胞中成分分布不均匀,常造成吸收测量的分布误差,可用一波长两区域法、两波长一区域法或扫描法校正这种误差。
显微镜吸收光度术_生物遗传辞典

显微镜吸收光度术

通过测定样品的透光度测定样品化学成分的技术。选择单色光照明(一般选吸收峰值的波长),首先测量通过样品周围空白区的光强度I0,再测量通过样品的光强度I,这样就可以得到样品的透光度(T)(T=I/I0)。进而推算出样品的吸光率(E)〔E=log(1/T)〕。根据朗伯-贝尔定律,E=K·C·d,此处C为样品浓度,K为克分子消光系数,d为样品厚度。又因为C=m/d·B,所以m=B·E/K,此处m为样品的质量,B为样品的面积。所以通过测量透光度,再转换为吸光率就可推算出样品的化学成分。

分别用波长为260纳米和280纳米的紫外光照射,可测定细胞中的核酸和蛋白质的含量。用波长为400~700纳米的可见光照明,可测定细胞中色素(叶绿素和血红素)的含量。用与细胞中特殊成分结合的染料来染色,利用染料与细胞中成分呈化学计量关系,则可通过测定细胞中染料的透光度来测定细胞中某种成分的含量。

由于细胞中成分分布不均匀,常造成吸收测量的分布误差,可用一波长两区域法、两波长一区域法或扫描法校正这种误差。扫描法可把测量面积减小到显微镜的分辨水平,在微小面积范围中可视被测成分为近似均匀分布,对整个样品进行全面积的逐点扫描后,把每个测点的化学成分加在一起,即可测得样品总的化学成分和面积的数值。利用这种高分辨的扫描技术,结合一些形态学分析,可对某些酶的分布和活性进行定量研究,分析核型和染色体带型。

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