标记免疫技术

标记免疫技术

用各种标记物标记抗原（或抗体），测定相应的抗体（或抗原）的方法。这种技术具有高度敏感性和特异性，因而得到广泛应用。根据标记方法的不同，主要分为荧光抗体技术（在抗体上标记荧光色素）、放射免疫测定（在抗原或抗体上标记放射性同位素）和酶联免疫吸附试验（在抗原或抗体上结合适当的酶）。荧光抗体技术和放射免疫测定虽然应用较广，但又各有缺点：前者操作时间长，肉眼观察结果不可靠，也不能定量和自动化；后者自动化设备价格太高，放射性同位素试剂的半衰期很短，而且会危及人体的健康。酶联免疫吸附试验具有上述两法的优点而无其缺点，是一种敏感、快速而简便的方法。

荧光抗体技术

以荧光色素标记抗体，制备成荧光抗体（简称FA），然后用这种荧光抗体涂染被检查的标本，再以紫外线光源的荧光显微镜进行检查。如果见到有发出荧光的抗原抗体反应物，即表明标本中有与荧光抗体相对应的抗原而被荧光抗体着染。这一技术的操作有直接和间接两种方法：直接法是以荧光素标记的特异性抗体直接与相应抗原结合，用于检测未知的抗原；间接法是将未标记的抗体与相应抗原结合起来，再加上用荧光素标记的抗抗体，形成抗原-抗体-荧光抗抗体复合物，用于检测未知的抗原或抗体。因为间接法所用标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，能与所有的同种属的抗体结合，所以比直接法方便，而且敏感性高。

利用此项技术可以比较准确、迅速、敏感地测出少量抗原、抗体以及抗原-抗体复合物在细胞内或组织内的定位和分布。此项技术已应用于免疫学、细菌学、病理学、肿瘤学的基础理论研究以及临床快速诊断。

放射免疫技术

将高灵敏度的同位素示踪法和高特异性的抗原抗体免疫化学反应结合使用的技术。它由于兼备上述两种技术的优点，近20年来，已成为发展迅速、用途广泛的定性、定量和定位的检测方法。选用适当的放射性同位素标记抗原，并与限量的抗体结合，形成可逆性的标记抗原-抗体复合物。如果加入待测的非标记抗原，则标记抗原与非标记抗原共同争夺限量抗体，最后达到平衡状态。加入的非标记抗原越多，标记抗原与抗体的结合就越少。

放射免疫技术已广泛应用于测定各种激素、肿瘤相关抗原（甲胎蛋白、癌胚抗原）、药物（地高辛、吗啡等）、病毒抗原（乙型肝炎表面抗原）以及lg等，其灵敏度可达10^-9～10^-15克／毫升，为目前最灵敏的分析方法，并有自动化设备。

酶联免疫吸附试验

简称酶标法，是20世纪70年代新开展的一项免疫血清学技术。当抗原或抗体结合到固相载体表面时，仍能保持自己的免疫活性。把抗原或抗体与酶的结合物再与相应的抗体或抗原结合，即可根据加入酶底物的颜色来判定有无相应的免疫反应。颜色的深浅与标本中相应抗体或抗原的量成正比。酶标法和放射免疫技术同是既特异又敏感的方法。

酶标法中最常用的是间接法和双抗体夹心法。间接法用于测定抗体。双抗体夹心法用于测定抗原。另外，还有与放射免疫试验相似的竞争法，即利用抗原对抗体的竞争性结合来检测未知的小分子抗原或半抗原。

酶标法具有特异、敏感、快速、简便和经济等特点，原则上可用于检测一切抗原、半抗原和抗体。目前已用酶标法测定血清蛋白质、肿瘤抗原、激素、药物、各种微生物和寄生虫的抗原，以及上述各种抗原所产生的相应抗体。在临床诊断、疾病普查、法医鉴定、兽医检查、植物病害检验等方面应用广泛。