16．4．1 化学部分
1）新药名称按卫生部卫药政发（91）第63号《西药（原料药）命名原则》的要求将该新药原料药命名为“超氧化物歧化酶溶液”，其制剂命名为“注射用超氧化物歧化酶”。
2）国内外专利及行政保护检索。
经检索，该药品在我国不受专利和行政保护。
3）结构确证。
自制的精制超氧化物歧化酶样品（纯度为电泳纯），与国外文献对照进行了下列试验。
（1）测试了理化常数：相对分子质量为31 600，等电点（pI）为7．12。
（2）以原子吸收光谱法，对Cu2＋和Zn2＋进行了测定，结果表明猪血－SOD每个分子含Cu2＋和Zn2＋各两个。
（3）在pH为7．0的2．5mmol磷酸盐缓冲液中，测定了UV－VIS，UV 250～270nm呈现锯齿型峰域，UV－λmax为265nm，摩尔吸收系数εM265nm为10 080，VIS－λmax为680nm，摩尔吸收系数εM630nm为340。
4）工艺、处方研究情况。
（1）原料药制备工艺。根据国内外文献资料，结合我国资源的实际情况，经过大量的实验室研究，最终选定了以新鲜猪血为原料，经除血浆、浮洗、溶血、除血红蛋白、盐析除杂蛋白和盐析沉淀六个步骤得SOD粗品，再经溶解、透析、两次柱层析、透析四个步骤得精品液，SOD收得率为50%～60%。
（2）制剂处方优选。参考国内部分生化药物冻干制剂的处方，设计了11个不同的处方，比较了不同的辅料和浓度对冻干制剂的成形以及稳定性的影响。通过考察，以处方用一种辅料——乳糖，冻干品成形较好，稳定性最好，成本也较低。本处方的特点是成品外观均匀，有一定结构强度，引湿性较低。
制剂的制备工艺是：先将乳糖配成20%的溶液，加入药用活性炭除热源，再将SOD溶液加入少量活性炭除热源，最后将两者按处方的规定混匀并补充注射用水至所需量，经除菌过滤、分装、冻干、熔封即得。
5）理化常数、纯度检查、含量测定等质量研究工作。
（1）物理常数：研究了8个物理常数，即相对分子质量为31 600，UV 250～270nm呈锯齿型吸收峰域，UV－λmax为265nm，εM265nm为10 080，VIS－λmax为680nm、εM630nm为340、等电点为7．12、每个分子含Cu2＋和Zn2＋各两个，与国外文献报道一致。
（2）鉴别试验：作了两项鉴别试验，一是在pH为8．2的缓冲液中用本品抑制连苯三酚的自氧化，该反应为自由基清除剂专有的反应；二是紫外吸收特性即A（265±3）nm/A280nm之值不小于1，因本品在265nm处的吸光度大于A280nm。这两项鉴别指标相结合，对本品的鉴别是专一的。
（3）纯度检查：在鉴别试验中A（265±3）nm/A280nm之值实际上也是纯度检查的项目之一，用于检查是否含有过多的杂蛋白。另外，根据生产工艺可能引进的杂质和生化药品的特点，作了pH值、硫酸盐和热源三项检查，检查方法按中国药典1990年版有关规定，均合格。
（4）效价、含量测定：效价测定比较了国外报道的SOD测定的四种方法，确定了连苯三酚自氧化法。该方法不仅有一定专属性，而且有灵敏度高（1～10μg即可检出）、稳定、重现性较好等特点。蛋白含量测定采用定氮法，定氮采用中国药典1990年版附录63页规定的方法，所得氮含量乘以6．25即为蛋白含量。该法重现性好。
6）稳定性研究情况。
（1）原料药“超氧化物歧化酶溶液”。
①影响因素试验：取3批样品，分别灌封于2mL安瓿中，熔封作试验样品。将样品露置于下述条件，于不同时间取样考察与0d考察数据比较。
在5℃、25℃、40℃、60℃和80℃分别进行了10d的试验，结果表明：在5℃条件下，外观、pH值、效价基本没有改变；25℃放置10dpH值约降低0．2个单位，效价损失约10%；40℃放置，pH值也明显降低，10d效价几乎为0；在60℃和80℃放置1d，效价几乎为0。各温度下放置的样品，电泳法检查未发现降解产物。
2 000～3 000Lx光照10d，试验结果表明，3批样品的pH值和效价均明显降低，效价损失约20%，电泳检查未发现降解产物。
高湿度试验因原料药为水溶液，未进行此项试验。
空气暴露10d试验。将样品液放入小烧杯内于室温放置，温度为18℃～23℃放置10d，结果表明：原料药“超氧化物歧化酶溶液”放置1d即开始出现乳光，放置3d开始浑浊，颜色也由蓝绿色变为黄绿色，效价急剧下降，于10d效价损失约90%。
②加速试验：将上市包装样品置40℃、相对湿度75%条件下放置3个月，结果表明：pH值略有升高、效价略有降低，但无降解产物。
③室温留样考察：3批样品在上市包装情况下室温放置36个月，期间定期观察。结果表明：注射用超氧化物歧化酶经36个月的放置，活性下降在10%以内，与动力学实验结果一致。
综合以上实验结果，证明注射用超氧化物歧化酶对高温、光照不稳定，打开安瓿后有强的吸湿性且不稳定，但在室温条件下很稳定，留样考察和动力学实验均证明效价降低10%的效期为3年以上。因此，可将本品在凉暗处遮光熔封保存的有效期定为2年。
（2）制剂“注射用超氧化物歧化酶”
①影响因素试验。取3批样品，除去外包装，直接露置于下述条件下，于不同时间取样考察与0d考察数据比较。
（A）在30℃、40℃和80℃分别进行了10d的试验，结果表明：在30℃条件下，外观、pH值、效价基本没有改变；40℃pH值略有升高，效价略有下降，但影响很小；在80℃，pH值和效价急剧下降，于第3d变为淡黄色，于第5d变为棕黄色，效价也降为0。40℃放置10d的HPLC图谱与0d比较无任何改变，80℃放置3d，HPLC图谱即有很大变化。
（B）2000～3000Lx光照10d，试验结果表明：3批样品的pH值有升高，效价降低约10%，HPLC检查未发现降解产物。
（C）在相对温度75%和92．5%分别放置10d，结果表明：打开安瓿的注射用超氧化物歧化酶有强的吸湿性，吸温后pH值降低、效价下降、无菌检查也不合格，但HPLC检查无降解产物。
（D）将安瓿打开后空气暴露10d，结果表明：制剂吸湿、pH值降低、活性下降、无菌检查也不合格，但吸湿后HPLC检查无降解产物。
②加速试验。将上市包装样品置40℃、相对湿度为75%的条件下放置3个月，结果表明：pH值略有升高、效价略有降低，但无降解产物。
③室温留样考察。3批样品在上市包装情况下室温放置36个月，其间定期考察，结果表明：注射用超氧化物歧化酶经36个月的放置，活性下降在10%以内，与动力学试验结果一致。
综合以上试验结果，证明注射用超氧化物歧化酶对高温、光照不稳定，打开安瓿后有强的吸湿性且不稳定，但在室温条件下很稳定，留样考察和动力学试验均证明效价降低10%的有效期为3年以上，因此，可将本品在凉暗处遮光熔封保存的有效期定为2年。
7）药品质量标准。
根据原料药和制剂的4号资料研究结果，制订质量标准情况如下。
（1）超氧化物歧化酶溶液。
本原料标准的制订参照了中国药典1990年版326页细胞色素c的标准，规定如下。
含量限度：每1mL不低于80 000u，比活不小于4 000u/mg蛋白。
性状：蓝绿色溶液。
鉴别：抑制连苯三酚自氧化的呈色反应和紫外吸收特性（A（265±3）nm/A280nm不小于1）。
检查：酸碱度（pH值6．0～8．0）、硫酸盐、热原。
含量测定：采用连苯三酚自氧化法测效价，定氮法测蛋白质含量。
类别：超氧自由基清除剂。
贮藏：密封，遮光，－10℃保存。
（2）注射用超氧化物歧化酶。
本制剂标准的制订参照了中国药典1990年版328页注射用细胞色素c的标准，规定如下。
含量限度：效价不得低于标示量的85%～120%。
性状：微蓝绿色或类白色块状物或粉末。
鉴别：同超氧化物歧化酶溶液。
检查：酸碱度（pH值6．0～8．0）、无菌、热原、过敏实验。
效价测定：同超氧化物歧化酶溶液。
类别：同超氧化物歧化酶溶液。
剂量：肌内、皮下或炎症局部注射，一次40 000u，每日1次；或一次80 000u，隔日一次。
规格：20 000u/支，40 000u/支。
贮藏：熔封，在凉暗处保存。
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