酵母的提取

三、酵母RNA的提取

（一）实验原理

酵母中RNA含量高，可占重量的3％～10％左右，而DNA含量很少，约占重量的0.5％，因此常采用以酵母为原料提取RNA。

根据制备目的不同，提取RNA的方法很多。工业上常用的有稀碱法和浓盐法。稀碱法是用稀碱溶解细胞壁，其操作简单，提取时间短，但所得产品有不同程度的解聚。浓盐法是依据酵母在高浓度盐溶液中细胞壁发生破损，经加热，RNA从细胞质释放出来，并利用等电点性质把其从溶液中沉淀出来。用这两种方法所得产品RNA已有部分变性，主要作为制备各种核苷酸及核苷的原料。

若需提取接近天然状态的RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇去蛋白质制备RNA。

（二）实验药品

1．NaCl（C.P.）；

2．6 mol/L HCl；

3．95％乙醇；

4．无水乙醚。

（三）实验方法

1．洗涤酵母：取啤酒酵母于4℃下用水洗涤3～4次，经3000r/min离心10min得到酵母泥，取20g酵母泥于培养皿中，置于100℃烘箱中烘干，测定其含水量，一般含水量在80％左右。

2．抽提：控制干酵母粉与食盐水之比为1∶10（w/w），盐的最终浓度为8～10％。称取酵母泥25g（相当于干酵母重5g左右）制成相当于干酵母重10％的悬浮液，加入20％盐水20mL，搅拌，放于沸水浴中抽提2h。

3．分离：将抽提液取出迅速冷却，分装到离心筒内于3000r/min离心30min，使抽提液与菌体残渣分离。

4．沉淀RNA：离心所得上清液，倒入烧杯内，置于水浴中冷却20min，搅拌条件下，小心地用6mol/L HCl调节pH值至2.5，在冰浴中静置20min，使RNA沉淀完全，经3000r/min离心15min，得到RNA沉淀，先用95％乙醇洗两次，每次用10mL，再用无水乙醚洗两次，每次用10mL。干燥即制得RNA制品。

5．含量测定：用紫外分光光度法及定磷法测定制品中RNA的含量，计算每克干酵母中RNA的量（分别见实验八中的第三、第四点）。用Folin-酚试剂法测定蛋白质的含量（见实验五中第二点）。

（四）实验记录

1．RNA的含量测定，分别见实验八中第三、第四点。

2．Folin-酚试剂法测定蛋白质的含量，见实验五中第二点。