实训七 无菌操作技术
一、目的、要求
通过在超净工作台上进行操作训练，使学生初步掌握植物组织培养的无菌操作技术。
二、材料与用具
超净工作台、75%酒精溶液、95%酒精、盛有培养基的培养瓶、接种器械（主要为剪刀、镊子等）、酒精灯、培养材料（根、茎、叶或种子等）、0.1%升汞溶液、无菌水等。
三、方法步骤
1.打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射20分钟。
2.用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。
3.操作前10分钟使超净工作台处于工作状态，让过滤空气吹拂工作台面和四周的台壁。
4.照射20分钟后，关闭紫外灯。
5.用75%酒精擦拭工作台和双手。
6.用蘸有75%酒精的纱布擦拭装有培养基的培养器皿，放进工作台。
7.把剪刀、镊子等器械浸泡在95%酒精中，然后在火焰上灭菌后，放在器架上冷却。
8.修整接种材料，除去不用的部分，然后进行外植体消毒：
（1）水洗，滤纸吸干。
（2）75%酒精中浸泡30秒。
（3）在0.1%升汞中浸泡3～8分钟，浸泡时可进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触。
（4）用无菌水冲洗3～5次。
9.接种：将种子或其他培养材料放到培养基上。
（1）用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都能烧到，打开瓶口，将培养瓶拿成斜角。
（2）用灼烧过的冷却的镊子取外植体材料转接到培养瓶中，轻轻插入或放在培养基表面。
（3）接种完毕后，将瓶口在火焰上转动灼烧，封口。
（4）操作期间应经常用75%酒精擦拭工作台和双手；接触器械应反复在95%的酒精中浸泡和在火焰上灭菌。注意：双手不能离开工作台，不能说话，走动或咳嗽等。
10.接种结束后，清理和关闭超净工作台。
四、实训思考
1.接种前应做哪些准备工作？
2.接种操作程序。
3.接种结束后应做哪些工作？
五、实验报告
1.将本次实验内容整理成一份实验报告。
2.接种1周后，观察接种材料的污染情况，并分析污染原因。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
