转基因植株蛋白质水平的鉴定

第三节　转基因植株蛋白质水平的鉴定

在转基因植株的鉴定中，常常检测目的基因编码的蛋白质水平。一些基因在转基因植株中的表达并不稳定，其表达产物被降解或者被修饰，导致基因功能不能正常发挥。尤其是近年来对于泛素降解系统的研究过程中，经常需要研究目的蛋白质在植株中的稳定性，使得检测植株中目的蛋白质的水平显得尤为重要。常用的方法有经典方法Western杂交方法。此外，随着分子生物学技术的发展，荧光标记技术日渐成熟，研究者常常将GFP或者是其他一些荧光蛋白的基因与目的基因融合表达，通过观察转基因植株中融合表达蛋白量来判断目的蛋白质是否发生了降解。荧光标记的方法虽然操作简单，但是由于某些标记后的蛋白质在性质上可能发生了改变，所以并不能真实反映出目的蛋白质在植株中的情况。Western杂交是直接用目的蛋白质的抗体对蛋白质水平进行分析，实验结果更加接近于真实情况。

图2-6　某个基因在烟

草花发育不同时期的表达情况(Hua etal.，2004)

研究目的蛋白质在植株中的分布经常采用的方法是免疫定位。该种方法利用抗原抗体反应在组织细胞原位将带有显色剂标记的特异性抗体与抗原结合，然后通过组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位和定量测定。只要是能够制备出抗体的物质均可以利用免疫定位的方法对其分布和含量进行分析，除了蛋白质外，植物体内激素水平也常用该方法进行分析。

免疫定位方法能研究蛋白质在组织中的定位，而研究蛋白质在细胞中的定位常采用的方法是GFP标记的方法。在该方法中，可以采用基因枪转化洋葱表皮观察融合蛋白在细胞中的表达定位，也可以通过转基因方法获得稳定遗传的转化株系，观察转化株系中GFP标记蛋白的表达定位。基因枪转化的方法一般用于观察融合蛋白在细胞中的瞬时表达情况，而通过转基因获得稳定遗传的融合表达株系则更方便研究者进行操作和分析，二者各有利弊，应根据实际情况进行选择。