转基因动物克隆

第四节　转基因动物克隆

微注射受精卵原核制作转基因哺乳动物由于整合率低（一般不超过15％），需要较多数量的受体动物，导致转基因动物的生产成本过高而限制了转基因动物技术的发展。

体细胞克隆技术的发展和成熟给转基因动物带来了新的生机。将体细胞在体外转染导入外源基因，转染的细胞经过筛选，利用阳性转染细胞的细胞核作为核供体进行移植即获得克隆转基因动物。Schnieke等（1997年）获得了转基因克隆羊，Cibelli等（1998年）用相似的方法获得了转基因克隆牛。

转基因克隆动物的制作包括：载体构建、体细胞培养和基因转染、鉴定转染细胞、核移植等。载体构建按照分子克隆方法构建含目的基因和含新霉素抗性选择基因的表达载体。体细胞的培养方法因不同学者而有差异，一般采用电转移法或脂质体介导的转染法转染继代的培养细胞。转染的细胞用G418或新霉素筛选，被转染的细胞存活，非转染细胞则被杀死。选择存活的细胞形成转基因细胞系。转基因细胞系通过PCR分析和Southern blotting杂交分析，确认转基因细胞系确实整合了外源基因。将阳性转基因细胞系进行核移植操作与去核的卵母细胞“受精”，“受精卵”激活后移植给代孕受体，经怀孕和分娩，可获得转基因克隆动物。

转基因动物克隆技术显示出明显的优势，一是生产效率高，显微注射法等传统的转基因技术具有随机性和不可见性，外源基因的拷贝数和整合位点都是随机的，还可能出现嵌合体，整合率极低，得到的转基因动物数量更少。据统计有的医疗公司从1989年至1997年用显微注射技术生产转基因动物平均51．4个动物才得到一个转基因后代，而得到一个转基因克隆后代只需20．8个母体。二是周期短，成本低。三是可以决定后代动物的性别。