饥饿对肝糖原含量的影响（碘试剂显色定性）

实验项目二十一　饥饿对肝糖原含量的影响（碘试剂显色定性）

学习目标

【知识目标】

（1）能用自己的语言描述糖原提取和鉴定的原理。

（2）能够迅速而准确地陈述本实验操作要点。

【能力目标】

（1）能够正确完成糖原提取和鉴定各项操作内容，做到步骤正确、动作连贯协调、内容全面无遗漏。

（2）能够正确分析糖原提取和鉴定的结果。

案例引导

患者，男，6岁，生长迟缓，易感染，皮肤黄，有黄色瘤，骨质疏松，脸圆，肥胖，腹胀，肝大，脾不大，低血糖。根据所学知识，对患者作出诊断。

（提示：糖原储积症Ⅰa型）

【实验原理】

许多因素可影响肝糖原的含量。如饱食后由消化道吸收的葡萄糖增多，肝糖原的合成也相应增多而致含量增加，可达肝重的5%左右。饥饿时肝糖原分解以补充血糖致其含量逐渐降低甚至全部消耗。

用三氯醋酸破坏肝组织的酶并沉淀蛋白质而保留糖原。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故应先用乙醇将滤液中的糖原沉淀，再溶于热水。糖原与碘作用呈红棕色。利用呈色反应可判断组织中糖原的存在。

【实验器材】

研钵，剪刀，天平，漏斗，试管，白瓷板，胶头滴管，恒温水浴箱。

【药品及试剂】

0.9%氯化钠，5%三氯醋酸，95%乙醇，碘试剂。

【试剂配制】

（1）0.9%氯化钠。

（2）5%三氯醋酸。

（3）95%乙醇。

（4）碘试剂：称取碘250mg和碘化钾500mg，共溶于100mL蒸馏水中。储存于棕色磨口玻璃瓶中待用。

操作流程

【操作步骤】

1.准备动物

选择体重在25g以上的健康小白鼠2只，随机编号。①号鼠实验前充分喂食并给饮水；②号鼠实验前严格禁食30h，只给饮水。

2.制备肝匀浆

迅速处死2只小白鼠，立即剖腹取出肝脏，再分别进行以下相同的处理：先用0.9%氯化钠溶液洗去鼠肝上附着的血液，用滤纸吸干。然后称取肝脏约1g，迅速剪碎，放入盛有1mL 5%三氯醋酸的研钵中磨至乳状，再加5%三氯醋酸3mL继续磨成肝匀浆（约4mL/g组织）。最后用漏斗过滤，将滤液收入已编号的刻度试管中。分别得①号鼠肝滤液（收入①号管）和②号鼠肝滤液（收入②号管）。

3.提取糖原

分别向①号管和②号管的滤液中各加入等量的95%乙醇，混匀，静置10min，置于离心机中离心5min（3000r/min）后取出。此时可见①号管溶液有白色沉淀物（即糖原），而②号管则无。小心倒去①号管的上清液而保留白色沉淀物，再加蒸馏水2 mL，摇匀。将①号管和②号管置于沸水中加热10～20min。此时，①号管中的沉淀物溶解，溶液有乳样光泽。

4.糖原鉴定

分别倒去①号管和②号管的部分溶液，每管保留溶液1mL左右，再向两管内各滴加碘试剂2～3滴，摇匀，观察呈色反应并记录，也可在白瓷板的两个凹穴中各滴加碘试剂1～2滴，然后滴加①号管中的溶液2滴于其中一个凹穴的碘试剂中，再滴加②号管中的溶液2滴于另一个凹穴的碘试剂中，观察呈色反应并记录。

【实验数据处理及结果分析】

观察实验现象及颜色变化，并及时做好记录。

【注意事项】

（1）杀死实验动物后，离体肝脏要迅速用三氯醋酸处理。

（2）制备肝匀浆时研磨要充分。

【实验意义】

肝糖原储存量约占肝重的5%，肌糖原储存量占肌重的2%～3%。肝糖原储存量虽不多，但在代谢过程中，它是机体体内糖的重要来源之一。其合成或分解对血糖浓度的调节起着重要作用。饥饿作为影响肝糖原含量的因素之一，可使肝糖原浓度逐渐降低。与之相反，饱食后肝糖原浓度增加。

能力检测

一、单项选择题

1.在糖原合成中下列可作为葡萄糖载体的是（　　）。

A.ADP　B.UDP　C.CDP　D.TDP　E.GDP

2.肌糖原分解不能直接补充血糖的原因是（　　）。

A.肌肉组织是储存葡萄糖的器官　　　B.肌肉组织缺乏葡萄糖激酶

C.肌肉组织缺乏萄萄糖－6－磷酸酶　　D.肌肉组织缺乏磷酸酶

E.肌糖原分解的产物是乳酸