生长谱法测定微生物的营养要求

实训35　生长谱法测定微生物的营养要求

一、实训目的

学习用生长谱法测定微生物营养需要的基本原理和方法。

二、实训原理

为了使微生物生长和繁殖，必须供给其所需要的营养素，如碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因子等，如果缺少其中一种，微生物便不能生长。根据这一特性，可将微生物接种在一种只缺少某种营养物的完全合适的琼脂培养基中，倒成平板，再将所缺的这种营养物（例如各种碳源）点植于平板上，经适温培养，该营养物便逐渐扩散于植点周围。该微生物若需要此种营养物，便在这种营养物扩散处生长繁殖，微生物繁殖之处便出现圆形菌落圈，即生长图形，故称此法为生长谱法。这种方法可以定性、定量地测定微生物对各种营养物质的需求。在微生物育种和营养缺陷型的鉴定中也采用此法。

三、实训器材

1．设备

超净工作台，高压蒸汽灭菌锅，电炉，恒温水浴锅，漩涡混旋器，生化培养箱。2．仪器与用具

φ120mm培养皿，1mL吸管，镊子，滤纸，烧杯，玻璃棒，锥形瓶。

3．培养基与试剂

合成培养基。

4．菌种

大肠杆菌，枯草芽孢杆菌。

四、实训步骤

1．实训准备

（1）准备装有10mL蒸馏水的试管，1mL吸管，分别包扎，于121℃高压灭菌20min。

（2）准备合成培养基100mL。

配方：（NH₄）₃PO₄1g；KCl　0．2g；MgSO₄·7H₂O　0．2；g豆芽汁10mL；琼脂20g；水1000mL；pH　7．2～7．5。

加12mL　0．04%的溴甲酚紫指示剂（pH　5．2～6．8，颜色由黄色变为紫色）。

依照配方折算后配制100mL，分装于试管中，装量为20mL，121℃高压灭菌20min。

（3）准备φ120mm培养皿，包扎，121℃高压灭菌20min。

（4）用打孔器制备φ6mm的圆形滤纸片若干，置于干燥洁净的培养皿中，包扎，121℃高压灭菌20min。

（5）配制6种糖的饱和溶液，分别是木糖、葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖的饱和溶液。

2．操作步骤

（1）将培养24h的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的斜面菌种分别用无菌水洗下制成菌悬液，用漩涡混旋器混匀。

图3－34　培养皿植糖区域示意图

（2）将合成培养基置于沸水浴中熔化后冷却至50℃左右，各加入大肠杆菌或枯草芽孢杆菌菌悬液1mL混匀后，分别倾注于φ120mm无菌培养皿中制成混菌平板，冷凝后备用。

（3）用记号笔在培养皿底部画出6个均匀植糖区域，用灭菌镊子分别夹取无菌滤纸片浸于①木糖、②葡萄糖、③半乳糖、④麦芽糖、⑤蔗糖、⑥乳糖六种糖的饱和溶液中，沥去多余糖液，对号放入平板的相应区域，并轻轻按压（图3－34）。

（4）将平板倒置于37℃培养箱中培养18～24h，观察各种糖周围有无菌落圈，注意不同糖周围指示剂变色区的大小。

五、结果记录

（1）绘制彩图表示大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的生长情况。

（2）根据实验结果，判断大肠杆菌和枯草芽孢杆菌生长所需碳源是什么。

六、思考题

（1）什么是生长谱法？

（2）试设计一个用生长谱法测定微生物对氮源营养要求的实验。