【摘要】：实训44 血清学反应——琼脂扩散沉淀反应一、实训目的通过本次实训，学习和掌握琼脂扩散方法。琼脂扩散是沉淀反应中较灵敏的方法，特异性强，应用很广。
血清学反应_琼脂扩散沉淀反应_微生物实验实训
实训44 血清学反应——琼脂扩散沉淀反应
一、实训目的
通过本次实训，学习和掌握琼脂扩散方法。
二、实训原理
由可溶性抗原（如血清、细菌浸出液等）和相应的抗体在半固体琼脂内扩散产生的沉淀反应，即琼脂扩散沉淀反应。琼脂扩散是沉淀反应中较灵敏的方法，特异性强，应用很广。
三、实训器材
1．材料和试剂
破伤风类毒素，破伤风抗毒素。
1．5%生理盐水琼脂：1．5%琼脂100mL，叠氮化钠0．1g，pH 7．2，NaCl 0．85%。
2．器具
载玻片，φ10cm培养皿，直径3mm打孔器，吸管，滴管，橡皮头，9号针头，滤纸片。
四、实训步骤
1．稀释
将破伤风抗毒素（抗体）稀释成1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160和原液6种浓度。
2．打孔
在洗净的载玻片上，用吸管加上3mL熔化的1．5%生理盐水琼脂，使其平铺于载玻片上约3mm厚，待凝固后，用直径3mm打孔器打成梅花形的7个小孔，如图3－41所示。孔间的距离为5mm，打孔以后用9号针头把琼脂块挑出来。
图3－41 载玻片上凝固琼脂打孔示意图
3．加抗原抗体
在中间的1号孔中加入抗菌素原液，周围小孔分别加入各种稀释度的抗体，添加量均为50mL。
4．湿室保温，观察反应
在培养皿底放一吸足水分的滤纸，做成湿室，把加了抗原抗体的载玻片放在湿室中，于28℃或30℃环境中过夜，让抗原抗体自然扩散，24h后观察抗原抗体反应后所呈现的沉淀带。
五、结果记录
绘图说明实验结果。
六、思考题
（1）琼脂扩散法能否用于凝集反应？
（2）本次实验有什么收获或体会？
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