血球计数板统计酵母菌活细胞数值

四、操作步骤

（1）稀释样品，为了便于计数，将样品适当稀释，使每格约含5个细胞。

（2）取干净的血球计数板，用厚盖玻片盖住中央的计数室，用移液管吸取少许充分摇匀的待测菌液于盖玻片的边缘，菌液则自行渗入计数室，静置5～10分钟即可计数。

（3）将血球计数板置于载物台上，用低倍镜找到小方格后换高倍镜观察计数。需不断地上、下旋动细调节器，以便看到计数室内不同深度的菌体。现以16×25规格的计数板为例，数四个角（左上、右上、左下、右下）的四个中格（即100小格）的酵母菌数。如果是25×16规格的计数板，除取四个角上四中格外，还取正中的一个中格（即80小格）。对位于大格线上的酵母菌只计大格的上方及左方线上的酵母菌，或只计下方及右方线上的酵母菌。

图6－1　血球计数板的结构图

每个样品重复计数3次，取平均值，再按公式计算每毫升菌液中所含的酵母菌数。

（4）洗涤血球计数板。

使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。

思考题

1．结果：将结果记录于下表中。A表示5个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。

25×16的计数板观察计数记录结果

16×25的计数板观察计数记录结果

2．为什么用两种不同规格的计数板测同一样品时，其结果一样？

3．在计数板计数操作过程中，说明血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？

4．如何正确使用计数板计数？其操作步骤和工作原理是什么？如何进行计算？

5．除计数板可以进行微生物细胞计数外，还有哪些方法可以进行细胞计数？