微生物的接种

一、微生物的接种

1．接种工具

图8－1为几种接种工具。

（1）接种环、接种针、接种钩：由金属丝与接种棒组成。金属丝常用铂丝、镍丝或0．5mm粗细的电炉丝，接种环直径0．4～0．5cm，接种棒市面有售，亦可用直径约0．6cm的玻璃棒自制。

（2）接种铲：可用车条，将其一端砸扁至呈平铲状，另一端套橡皮管作棒柄。

（3）玻璃涂棒：系采用直径为0．5cm的玻璃棒，将其烧灼弯曲而成。用纸包裹，干热灭菌备用。

（4）吸管：在干燥洁净的吸管颈端0．3～2．5cm处用尖头镊子塞入少许普通棉花，以防止接种时将细菌吸入口中，或将口中细菌吹入管内，达到过滤除菌的目的。用纸条包裹或置于金属筒中，干热灭菌备用。或者使用1ml微量移液枪，将枪头置于盒子中，报纸包裹灭菌待用。

图8－1　接种工具

1．接种针；2．接种环；3．接钟钩；4、5．玻璃涂棒；6．接种圈；7．接种锄；8．小解剖刀

2．接种技术

（1）无菌操作要点：在微生物学实验中，应牢固树立“无菌”概念，严格执行无菌操作。要做到不使被接种的微生物受到杂菌污染，也不容许该微生物污染其培养器皿以外的环境。接种工作可以在无菌室、无菌接种柜或超净工作台上进行。应使用无菌用品并在火焰附近（常用酒精灯）操作。

凡试管、三角瓶等均应在火焰附近拔除橡胶塞。拔塞后的试管与三角瓶口端应始终向着火焰并保持在火焰附近；试管和三角瓶应处于平斜状态，不得垂直向上，以防空气中的杂菌落入。

橡胶塞拔除后用手指夹住，不得随意乱放。除橡胶塞头外，操作者不应沾碰橡胶塞的其他部位。橡胶塞进出管口均需通过火焰。

无菌培养皿的接种工作亦需在火焰附近进行。培养皿向着火焰一边少许开启，开盖程度以能供接种工具操作即可。

（2）斜面菌种接入斜面培养基的无菌操作法，是最常用的基本操作（图8－2）。

图8－2　斜面接种操作示意图

点燃酒精灯，在火焰周围可形成无菌区。

左手夹住菌种管和待接种的斜面培养基试管，右手将接种环或接种针通过火焰灭菌，即垂直地或稍斜地在火焰上除手柄外烧灼整个杆体。金属丝部分需烧至红热。

用右手拔两橡胶塞，分别夹在手掌与小指、小指与无名指之间。试管口在火焰上通过2～3次以杀杂菌。试管保持平斜位，管口保持在火焰附近。

将已灭菌的接种环伸入菌种管内，先在管内无菌处冷却，然后挑取少量菌体。带菌接种环移至待接种试管中，自斜面底端由下而上轻轻划直线或波浪线。注意接种环出入试管过程中勿碰管壁、管口或管外物品；划线时勿划破培养基。

接种完毕，试管口通过火焰，并在火焰旁塞回橡胶塞。接种环再经烧灼灭菌，放回原处。