肝中酮体的生成作用

【实验目的】

1.学习实验所用动物组织的获取及组织匀浆的制备。

2.验证酮体的生成是肝特有的功能。

【实验原理】

本实验的反应实质为酶促反应,底物为丁酸,酶为肝组织匀浆里所特含的催化酮体生成的酶系,终产物为酮体。显色粉中硝普钠可与乙酰乙酸及丙酮反应,生成紫红色化合物。因肌肉组织匀浆里不含催化酮体生成的酶系,故不产生上述显色反应。

【实验材料】

1.动物　家兔(或豚鼠)1只。

2.器材　手术剪、试管架、试管、记号笔、滴管、研钵、离心机、恒温水浴箱、白瓷反应板。

【实验试剂】

1.0.9%氯化钠溶液。

2.洛克溶液(取氯化钠0.9g、氯化钾0.042g、氯化钙0.024g、碳酸氢钠0.02g、葡萄糖0.1g,加少量蒸馏水溶解后,再加蒸馏水稀释至100ml)。

3.0.5mol/L丁酸溶液(取44.0g正丁酸,溶于适量0.1mol/L氢氧化钠溶液,再加0.1mol/L氢氧化钠溶液稀释至1000ml)。

4.pH=7.6的磷酸盐缓冲液(取Na2HPO4·2H2O 7.74g,NaH2PO4·H2O 0.897g,加蒸馏水稀释至500ml。精测pH至7.6)。

5.15%三氯醋酸溶液。

6.显色粉(取硝普钠1g、无水碳酸钠30g、硫酸铵50g,混合研匀即得)。

【操作】

1.制备肝匀浆和肌匀浆:取家兔(或豚鼠),猛击脑后致死,迅速取其肝和肌肉组织,用0.9%氯化钠溶液冲洗除去血渍,分别剪碎后放入两个研钵内,按1(g)∶3(ml)的比例加入0.9%氯化钠溶液,充分研磨,制成肝匀浆和肌匀浆。

2.取4支试管,编号,按附表-1分别加入各种试剂。

附表-1　4支试管内各种试剂的量

3.将以上4支试管摇匀,置于37℃恒温水浴中保温40～50min。

4.取出上述试管,每管中各加15%三氯醋酸溶液20滴,混合均匀,进行3000/min的离心操作5min。

5.分别取上述4支离心试管中的上清液各10滴,滴于白瓷反应板的4个凹槽中,再向4个凹槽中分别加显色粉约0.1g,观察各凹槽的颜色反应。

【报告】

1.记录各试管液与显色粉反应的颜色变化结果,并分析原因。

2.结合本次实验说明酮体生成和利用的代谢特点。

(柳晓燕)